细胞培养3学习.pptxVIP

原代培养：是指将机体取出的组织或细胞进行初次培养的　　　　　 过程。初次培养的细胞大约增殖10代左右，这　　　　 样的细胞称为原代细胞(primary cell);2.３.1 原代培养;取材： 鸡胚组织 鼠胚组织 皮肤和黏膜 血细胞 内脏和实体瘤 ;组织细胞分离： 机械法—— 离心(500-1000rpm) 　切割分散 　机械分散 消化法—— 胰蛋白酶消化 　胶原酶消化 　螯合剂消化 ; 2.3.2 传代培养;2.3 细胞的基本培养技术;2.3 细胞的基本培养技术;PBS清洗;2.3 细胞的基本培养技术;2.3 细胞的基本培养技术;贴壁细胞传代时应注意问题：;2.3.3 常用培养技术;1907年 Harrison 单盖玻片培养　;2.3 细胞的基本培养技术;2.3.3.4克隆培养法;影响克隆形成率的因素;克隆培养技术;2.3.3.5 细胞同步化培养;诱导细胞同步化：;细胞系：初代培养物开始第一次传代培养后的细 胞，即称之为细胞系。 细胞株：从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细 胞分离培养或通过筛选的方法，由单细 胞增殖形成的细胞群，称细胞株。;2.4.1　建立细胞系（或株）的要求;细胞冻存——冻存液 70%培养基+20%血清+10%DMSO;细胞冻存:;细胞复苏;细胞培养的污染问题十分重要，一旦发生污染，将导致前功尽弃。所以细胞培养一定要建立无菌观念。遇到培养污染要分析原因，及时处理。;2.6.1污染判定 ;2.6.2 污染途径;2.6.3 污染物;革兰氏阴性菌;2.6 培养细胞的污染、检测及防止;2.6.4 污染物的检测;1）荧光技术检测： 支原体含有DNA，能与一种荧光染料Hoechest 33258特异性的结合，可根据细胞表面的荧光 来显示细胞是否污染有支原体。 2）直接培养法： 4）DNA分子杂交： 检测完毕后，所有实验用具均应经过高压消毒处理。;支原体污染的DNA检测图:;解决方案:;细胞间交叉污染;１．实现无血清无蛋白培养 ２．改变细胞的能量代谢途径 ３．促进细胞贴壁性 ４．增强细胞抗凋亡活性 ５．控制增殖速率 ６．改善重组蛋白糖基化 ;动物细胞的大规模培养;微载体培养;CytodexI: 带有正电荷,细胞毒性最小,应用最广泛对培 养液中的血清有较强的吸附作用;特征:;其他:;微囊化培养;成功例子：;本世纪80年代初，Lim＆Sum制成了细胞能在其中生长繁殖的微囊。如图1-3所示，制备动物细胞微囊所用的材料，主要是海藻酸(ALG)，和多聚赖氨酸(PLL)，海藻酸是以1,4-键联接的多聚甘露糖醛酸和古罗糖醛酸，此两者的不同比例及海藻酸本身的纯度、粘度都是影响微囊形成的重要条件。赖氨酸分子量的大小(通常在40，000~80，000之间)，其溶液的浓度及与海藻酸钠球混合的时间，溶液的pH，温度等都会影响微囊膜孔径的大小甚至影响它的半渗透作用。 ;2.7 动物细胞的大规模培养;2.7 动物细胞的大规模培养; 中空纤维反应器：左右两箭头为无菌空气进出口。细 胞生长在由半透性的多孔膜制成的中空纤维外表面。;2.7 动物细胞的大规模培养;2.7 动物细胞的大规模培养;操作模式;;;;感谢您的观看！