香豆素分析学习.pptxVIP

概述; ;第一节 结构、分布、理化性质;香豆素按结构分为;（一）简单香豆素类;（二）呋喃香豆素类;1．6,7-呋喃香豆素（线型） ;2．7,8-呋喃香豆素（角型） ;（三）吡喃香豆素类 ;1．6,7-吡喃香豆素（线型） ;2．7,8-吡喃香豆素（角型） ;（四）其他香豆素类;二、 分布;;;;多具芳香气，能随水蒸气挥发或升华。 不溶于水或难溶于水，可溶于石油醚、苯、乙醚、氯仿或乙醇等溶剂中；一般含氧取代基的香豆素衍生物，在石油醚中的溶解度比较小，冷的情况下更小。 在定量测定时，多用氯仿和乙醇来提取。 ;;;（2）酚类试剂反应： 因该类化合物多具酚羟基，能和常规酚类试剂反应，如三氯化铁、硝酸银的氨溶液、三氯化铁- 铁氰化钾。 如果香豆素化合物的C6位上（即酚羟基的对位）没有取代基，则能和 Emerson试剂反应现橙~红色；与Gibbs试剂反应现蓝色。 Emerson反应是将香豆素类化合物溶于碱性溶液中，加入2% 4- 氨基安替比林溶液数滴及8%铁氰化钾溶液2~3滴即可显色，其反应如下： ;;（2）羟基香豆素在紫外光下有强的荧光，不难辨认；呋喃香豆素较弱，但也能在紫外光下显示蓝、紫、棕、绿、黄等色。必要时可喷10% KOH醇液，或20% SbCl3氯仿液以显色。 （3）香豆素类化合物羟基和芳环形成的共轭体系具较强的紫外特征吸收，不同的香豆素化合物在不同pH条件下表现不同的光谱特性，对该类成分的分析具重要意义。 ; ;化学定性方法：; 2．颜色反应 （1）蛇床子的鉴别 取蛇床子粉末2g，加乙醇20ml，加热回流30min，滤过。取滤液数滴，点于白瓷板上，置紫外光灯（365nm）下观察，显蓝紫色荧光； 另取滤液 2ml，加等量的3％碳酸钠溶液，加热5min，放冷，再加新制的重氮对硝基苯胺试液1~2滴，即显樱红色。 ; （2）白芷的鉴别 取少量样品粉末，加乙醚，振摇5min后静置20min，取上清液 1ml，加入7%盐酸羟胺甲醇溶液2~3滴，20%KOH甲醇溶液2~3滴，摇匀，在水溶上微热，冷却后加稀盐酸调到pH 3 ~ 4，然后加入1%三氯化铁乙醇溶液1~2滴，溶液显紫红色。; 1．应用特点 薄层色谱法可用于含多类成分的中药的鉴别，可用标准品或标准药材对照，再与上述荧光反应、颜色反应配合，即可方便、快速鉴别含香豆素类化合物的中药。 因香豆素类成分大都具荧光，含香豆素类中药提取物，在硅胶板上的色谱指纹图具一定的鉴别意义， 可用化学对照品对照； 可以使用经准确鉴定学名的标准药材做对照品；;;;第三节 香豆素定量分析;;;;; 三、高效液相色谱法 1．白芷中3种香豆素的测定 测定氧化前胡素（oxypeucedanin，Ⅰ），欧前胡素（imperatorin，Ⅱ）和异欧前胡素（isoimperatorin，Ⅲ），其方法是：准确称取Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ标准品各5mg，用乙酸乙酯溶解，定容至50ml，分别取此溶液、、、、、，均用乙酸乙酯定容至10m1，制得 6个不同浓度的标准溶液。 ; 按下述条件进行HPLC分析：以μ-Bondapak C18柱为色谱分离柱，加预柱以防样品污染分析柱，流动相为甲醇- 水（70：30），流速／min，UV 254nm检测各组分峰，进样10μl，以峰面积为纵坐标，各成分浓度为横坐标，得3条通过原点的直线，线性范围／ml，其回归方程如下： 氧化前胡素 ， 欧前胡素 ， 异欧前胡素 ， 精密称取白芷粉（40目）2g，置索氏提取器中，用乙醚提取9h，回收乙醚，真空干燥，残渣溶于乙酸乙酯并定容成25ml，经Millipore样品过滤器过滤，同上色谱条件测定。标准品与样品分离情况（见图 13-1）较好。 ;第37页/共59页;;;;;;秦皮;;;;;;;标准曲线的制备：精密吸取对照品溶液30、50、70、90与 110μl，照薄层色谱法试验，沿硅胶Ｇ薄层板的起始线分别点成 3~5cm的长条（据点样量的多少而定），以正丁醇- 氯仿- 甲苯- 甲酸（8：1：1：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm） 下检视定位，分别刮取对照品条斑置具塞锥形瓶中。同时刮取同一薄层板下端与条斑等面积的硅胶Ｇ作为空白，置另一具塞锥形瓶中，各瓶均精密加入乙醇10ml，45℃水浴小心加热30min，放冷，滤过，取续滤液，照分光光度法，在336nm的波长处测定吸收度，以吸收度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲