植物的原生质体培养课件课件.pptVIP

5、原生质体活力检测 ?染色法 ? FDA法：FDA（二乙酸荧光素）能穿越细胞质膜，被活细胞内的酯酶裂解，在荧光显微镜下发荧光（荧光素）。 ?伊凡蓝法：伊凡蓝不能穿过质膜，但质膜受到严重损坏使细胞被染色。 ?胞质环流法：是否存在胞质环流判断原生 质体活力； ?渗透压变化法：活原生质体会随着外界渗透压的变化体积变化。 ?氧电极法：活原生质体在光照下光合放氧，无光呼吸耗氧。 第30页，共49页，2022年，5月20日，2点4分，星期五 6、影响原生质体活力的因素 ? 分离材料的生理状态； ? 酶解条件：酶质量、浓度、酶解温度、酶解时间、酶溶液的渗透压； ? 分离条件：离心次数、离心速度、纯化方法、分离持续时间； ? 环境条件：操作环境的温度、分离用具的影响。 第31页，共49页，2022年，5月20日，2点4分，星期五 二、原生质体的培养 （一）培养基 1．渗透压：原生质体的渗透压原则是培养基渗透压与细胞渗透压等渗。常用的渗透压调节剂：甘露醇、山梨醇、蔗糖和葡萄糖等。 2．无机盐 3．有机成分：维生素、氨基酸、糖及糖醇等，酵母提取物、水解酪蛋白。 4．激素：常用的激素：NAA、IAA、BA与2,4-D 5．pH值 第32页，共49页，2022年，5月20日，2点4分，星期五 （二）原生质体培养方法 ?液体浅层培养 ?固体培养 ?液体－固体双层培养 ?