蛋白质生物合成2.pptxVIP

第四节 原核生物的翻译过程;第2页/共58页;第3页/共58页;第4页/共58页;第5页/共58页;第6页/共58页;一、翻 译 的 起 始;1. 30S亚基与mRNA的结合;第9页/共58页;第10页/共58页;IF3促进30S亚基与mRNA的结合； IF2参与起始tRNA与30S亚基的结合；IF1可能只是作为起始复合物的一个组分，只起稳定作用，而不是识别30S亚基中的特别成分。 IF3有两个作用，第一是稳定游离的30S亚基，第二个功能是保证小亚基与mRNA的结合。只有IF3和小亚基共同作用才能形成正确的起始复合物。;第12页/共58页;第13页/共58页;第14页/共58页;第15页/共58页;mRNA与30S亚基的结合需要mRNA与16S rRNA之间的碱基配对关系。 在16S rRNA的3’端区域存在与mRNA互补的保守序列CCUCCU。该序列的突变可抑制翻译的进行。;2. 30S-IF3-mRNA复合物与起始tRNA结合;甲酸基-四氢呋喃;第19页/共58页;第20页/共58页;第21页/共58页;甲酰化;起始tRNA进入P位是在IF2的协助下完成的。IF2先与起始tRNA形成二元复合物（IF2-fMet-tRNAf）。 IF2只能与起始tRNA相互作用，因此保证了其他的tRNA不能用于起始。IF2还有依赖核糖体的GTP酶的活性。 二元复合物具备了与30S亚基结合的能力，同时GTP也加入到复合物中去。;3. 70S复合物的形成;第25页/共58页;第26页/共58页;第27页/共58页;二、 肽链的延伸;EF-Tu与鸟苷酸结合，其活性受鸟苷酸的调节。在GTP存在时，EF-Tu有活性；当GTP水解为GDP时，呈无活性状态。 EF-Tu-GDP在EF-Ts作用下，释放GDP。EF-Ts被GTP取代，重新形成EF-Tu-GTP，这一过程称为Tu-Ts循环。 Ef-Tu-GTP能结合氨基酰tRNA，形成EF-Tu-GTP-氨基酰-tRNA三元复合物，而不能与起始tRNA结合，这样保证了起始tRNA不参与肽链的延伸。;第30页/共58页;在核糖体的P位被起始tRNA或肽酰-tRNA占据的情况下，三元复合物进入到A位，GTP水解，并释放EF-Tu-GDP。 而后发生转肽反应，即A位的氨基酰-tRNA所携带的氨基酸与P位的肽酰-tRNA的肽链（或起始氨基酸）形成肽键，肽链延长了一个氨基酸。催化该反应的酶为肽酰转移酶（peptidyl transferase）。;第32页/共58页;第33页/共58页;用GTP的类似物GMP-PCP代替GTP与EF-Tu结合，可使氨基酰-tRNA进入A位，但不能形成肽键。 黄色霉素（kirromycin）可抑制EF-Tu的活性。当黄色霉素与EF-Tu结合时，EF-Tu-GTP仍能使氨基酰-tRNA进入A位，但不能释放EF-Tu-GDP，使肽键不能形成，蛋白质合成停止。EF-Tu-GDP的不能释放造成了核糖体不能形成正确的构象，因而不能完成转肽反应。;第35页/共58页;转肽反应使P位的肽酰-tRNA的肽链转移给A位的tRNA，而P位的tRNA变为空载。 转肽酶活性位于核糖体的大亚基上，该位点可将A位和P位的tRNA拉近，以便形成肽键。 完成这一反应需要23S rRNA和50S亚基的蛋白质，但起催化作用的是23SrRNA。;转肽结束以后，核糖体沿mRNA向前移动一个密码子的距离，这一过程称为移位（translocation）。 移位的同时，将P位的空载tRNA经E位点逐出核糖体。A位的tRNA移至P位，以便新的氨基酰-tRNA进入。;移位可分为两个阶段，第一个阶段，当肽键形成后，A位的tRNA或是经自身移动或是50S亚基相对于30S亚基移动，进入P位。 第二个阶段，tRNA的反密码子端移动至P位，并与密码子配对。 移位需要GTP和另一种延伸因子EF-G的参与。 在EF-G不存在的情况下，核糖体也可以发生移位，但效率很低。说明移位是核糖体固有的性质。;第39页/共58页;第40页/共58页;在梭链孢酸（fusidic acid）存在时，EF-G能与核糖体结合，GTP也可水解，核糖体也可正常移位，但EF-G-GDP不能释放，使肽链的延伸终止。;第42页/共58页;EF-Tu和EF-G不能同时与核糖体结合，二者交替与核糖体结合与释放。目前还不清楚两种延伸因子间的排斥是通过核糖体的构象引起还是二者竞争同一结合位点引起。 二者交替与核糖体结合说明蛋白质合成是一个有序的过程。 两种延伸因子与核糖体的结合都要有GTP而不是GDP的存在，可能是GTP能使延伸因子形成有活性的形式。;第44页/共58页;三、 合成的终止;没有一种tRNA能识别终止密码子，终止密码子是由蛋白质因子来识别。大肠