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第2节第1课时 微生物的基本培养技术问题探讨 向经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌,再经过发酵就可以制成酸奶。由于制作工艺并不复杂,一些人会在家里自制酸奶。自制酸奶虽然方便,但是食用自制酸奶导致肠胃不适的事例屡见不鲜,主要原因是在制作过程中有杂菌混入。那么,怎样才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢?本节聚焦一、什么是培养基?1二、什么是无菌技术?2三、怎样进行酵母菌的纯培养?3一、培养基的配制培养基——指微生物生存的环境和营养物质1.基本成分:水、碳源、氮源、无机盐碳源⑴概念:凡能为微生物代谢提供碳元素的物质无机碳源:CO2、CO32-、HCO3-自养微生物⑵来源:有机碳源:牛肉膏、蛋白胨等异养微生物⑶作用:①参与合成有机物 ②异养微生物的能源物质氮源⑴概念:凡能为微生物代谢提供氮元素的物质无机氮源:NH4+、N2、NO3-(为硝化细菌提供N源和能源)⑵来源:有机氮源:牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素、氨基酸等⑶作用:主要用于合成蛋白质、核酸及含N的代谢产物水:是生命活动所必需的,生物体内含量最多的化合物无机盐:为微生物提供除碳、氮以外的元素思考:为什么大多数培养基都有这四类物质?2.培养基的配制原则①目的要明确:配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。②营养要协调:注意各种营养物质的浓度和比例。③pH要适宜:培养不同微生物所需pH不同,细菌为6.5~7.5,放线菌为7.5~8.5,真菌为5.0~6.0。3.营养物质配方中的各成分为微生物提供了哪些营养?牛肉膏蛋白胨培养基配方碳源、氮源、 磷酸盐和维生素牛肉膏5.0g蛋白胨10.0gNaCl 5.0g将上述物质溶解后,用蒸馏水定容至1 000ml。氮源和维生素无机盐H、O对异养微生物来说,含C、N的化合物既是碳源,也是氮源。即有些化合物作为营养要素成分时并非单一方面的作用。并非所有微生物都需添加特殊营养物质4.培养基的类型(1)固体培养基在一般培养温度下呈固体状态的培养基都称固体培养基。在液体培养基中加入2%左右的琼脂,加热至100℃溶解,40℃下冷却并凝固,使其成为固体状态即为固体培养基(2)液体培养基液体培养基(liquid culture medium),固体培养基的对应词,是微生物或动植物细胞的液状培养基。它具有进行通气培养、振荡培养的优点。在静止的条件下,在菌体或培养细胞的周围,形成透过养分的壁障,养分的摄入受到阻碍。由于在通气或在振荡的条件下,可消除这种阻碍以及增加供氧量,所以有利于细胞生长,提高生产量。(3)半固体培养基半固体培养基,如果把少量的凝固剂加入到液体培养基中,就制成了半固体培养基。以琼脂为例,它的用量在0.2~0.7%之间。这种培养基有时可用来观察微生物的动力,有时用来保藏菌种。无动力有动力(弥散)二、无菌技术1.消毒的概念:使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物2.灭菌的概念:是指使用较为强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子3.无菌技术的主要内容:①对操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒;②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。二、无菌技术1.消毒的概念:使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物2.灭菌的概念:是指使用较为强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢和孢子3.无菌技术的主要内容:①对操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒;②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。③为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在酒精灯火焰附近进行④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触4.生物消毒法的概念及应用:生物消毒法是指利用生物或其代谢物除去环境中的部分微生物的方法消毒和灭菌的比较项目条件结果常用方法应用范围消毒较为温和的物理、化学或生物等方法仅杀死物体表面或内部一部分微生物煮沸消毒法日常用品巴氏消毒法不耐高温的液体化学药剂消毒法用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源灭菌强烈的理化方法杀死物体内外所有的微生物灼烧灭菌法接种工具干热灭菌法玻璃器皿、金属用具湿热灭菌法培养基及容器小资料消毒 日常生活中经常用到煮沸消毒法。在100℃煮沸5~6min,可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢。对于一些不耐高温的液体,如牛奶,则可使用巴氏消毒法,即62~65℃消毒30min或80~90℃处理30s~1min,可以杀死牛奶中的绝大多数微生物,并且不破坏牛奶的营养成分。此外,人们也常使用化学药物进行消毒,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等。除了以上方法,还常用紫外线进行消毒。例如,接种室、接种箱或超净工作台,在使用前,可以用紫外线照射30min,以杀死物体表面或空气中的微
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