种子的扩大培养.ppt

研究发现，采用被孢霉进行Υ亚麻酸发酵时接种量可以明显影响菌丝体的形态，从而影响菌体干重和Υ亚麻酸产量。 第29页，共48页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 不同接种量影响菌体的生长和发酵 第30页，共48页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 发酵前期发酵液作为种子，发酵指数明显提高 发酵后期菌体自溶明显，影响提炼收率 第31页，共48页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 20%种子罐＋10%发酵罐前期发酵液效果最好 第32页，共48页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 6、种龄 指种子罐中培养的菌体开始移入下一级种子罐或发酵罐时的培养时间。 种龄短：菌体太少；种龄长：易老化。 原则：对数生长期末，细胞活力强，菌体浓度相对较大，但是最终由实验结果定。 第33页，共48页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 大量地接入培养成熟的菌种的优点： 缩短生长过程的延缓期，因而缩短了 　发酵周期，提高了设备利用率 节约发酵培养的动力消耗 有利于减少染菌机会 第34页，共48页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 关于种子的扩大培养 第1页，共48页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定发酵产量高、数量充足、无污染的生产菌种的过程。 第一节 种子扩大培养的目的与要求 种子扩大培养 第2页，共48页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 种子扩培的目的 接种量的需要 菌种的驯化 缩短发酵时间、保证生产水平 第3页，共48页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 作为种子的准则 细胞生长活力强，移种至发酵罐后能迅速生长，迟缓期短； 生理性状稳定； 菌体总量及浓度能满足大容量发酵罐的要求； 无杂菌污染； 保持稳定的生产能力。 第4页，共48页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 4.1 种子的制备工艺 第5页，共48页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 第6页，共48页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 实验室阶段：所用的设备为培养箱、摇床等实验室常见设备，在工厂中培养过程一般都在菌种室完成。 生产车间阶段：种子培养在种子罐里面进行，一般在工程归为发酵车间管理。 第7页，共48页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 第8页，共48页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 一、实验室种子的制备 一般采用两种方式： 对于产孢子能力强及孢子发芽、生长繁殖快的菌种可以采用固体培养基培养孢子，孢子可直接作为种子罐的种子。 对于产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌种，可以用液体培养法，获得菌丝体，作为种子。 第9页，共48页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 ①、斜面 (AS1.299) 培养基：蛋白胨 1%，牛肉膏1%，氯化钠 0.5 琼脂 2%， pH 7.0-7.2 培养基特点：有利于菌体的生长，原料比较精细 培养条件：32℃，生长18-24小时 对于不产孢子和孢子发芽慢的微生物 ——获得一定数量和质量的菌体，如谷氨酸的种子培养。 第10页，共48页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 ②. 一级种子（摇瓶） 培养条件：于1000ml三角瓶中，装液200-250ml,32℃培养12小时。 培养基：葡萄糖2%，尿素0.5%，玉米浆 2.5%， K2HPO4 0.1% 培养基特点：有利于菌体的生长，所使用的原料已经基本接近于发酵培养基 对于不产孢子和孢子发芽慢的微生物 第11页，共48页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 ③.二级种子(种子罐) 培养条件：在种子罐中培养（容积为发酵罐的1%(10%)），32℃培养7-10个小时 培养基：和一级种子相似，其中葡萄糖用水解糖代替，浓度为2.5% 培养基的特点：长菌体，更接近于发酵培养基 第12页，共48页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 ④种子的质量要求： 108-109个/ml 大小均匀，呈单个或八字排列 PH 7.0-7.2时结束，6.8→8→7.0-7.2 活力旺盛 第13页，共48页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 获得一定数量和质量的孢子 与菌丝体培养相比步骤少，因而更容易获得量和质稳定的种子，但操作繁琐。 对于产孢子的微生物 获得一定数量和质量的菌丝体 便于操作，但需要更仔细的控制。 第14页，共48页，2022年，5月20日，14点54分，星期五