种子的扩大培养 (2).ppt

关于种子的扩大培养 (2) 第1页，共25页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 * 学习目标 了解基本概念、种子培养的一般过程及培养各阶段的目的要求； 理解种子培养的各种影响因素； 掌握接种方法、种子质量控制方法、种子培养中的问题分析及处理手段。 第2页，共25页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 * ◆种子及发酵级数 孢子(或菌丝)接入到体积较小的种子罐中，经培养后形成大量的菌丝——一级种子；把一级种子转入发酵罐内发酵，称为二级发酵。 如果将一级种子接入体积较大的种子罐内，经过培养形成更多的菌丝——二级种子；将二级种子转入发酵罐内发酵，称为三级发酵。 使用三级种子的发酵，称为四级发酵。 第一节 基本概念 ◆种子培养 指提供给种子适宜的生长繁殖条件，使种子能够迅速生长成合格的菌体的过程。 ◆种子的扩大培养 休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养而获得一定数量和质量纯种的过程。 第3页，共25页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 * ◆接种 将孢子或菌落，或试管、三角瓶或种子罐中菌体接入培养容器的操作过程。 ◆接种量 移种的种子液体积和培养液体积之比。 ◆接种龄 种子罐中培养的菌体开始移种到下一级种 子罐或发酵罐的培养时间。 双种法 2个种子罐的种子接人1个发酵罐的接种方法。 倒种法 以适宜的发酵液倒出部分对另一发酵罐作为种子的接种方法。 混种法 以种子液和发酵液混合作为发酵罐的种子的接种方法。 第4页，共25页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 * ◇种醪 接入至种子罐中的种子经培养后所得的含有一定菌体浓度的种子液。 ◇专性好气菌 只有在空气或氧O2存在的条件下才能生长的菌体，氧为呼吸过程中的最终受氢体。 ◇专性厌气菌 只有在没有空气或无氧条件下才能生长的菌体，分子态氧对它们有毒害作用，如丙酮丁醇梭状芽孢杆菌。 ◇兼性好气菌或兼性厌气菌 既能在空气或有氧条件下生长，又能在没有空气或缺氧条件下生长的菌体。包括酵母菌及部分细菌。 第5页，共25页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 * 第二节 种子培养过程 包括：孢子制备过程，种子制备过程 一、种子制备工艺 ——实验室阶段和种子罐生产培养阶段 1．实验室种子制备 （1）斜面种子培养 活化菌种，同时也培养一定数量的斜面种子。 （2）液体培养 包括液体试管和三角瓶摇床震荡或回旋式培养。 ①液体试管培养 无菌条件下，用接种针自斜面试管挑取一环斜面种子菌体，接入装有液体培养液的试管，摇匀后，置培养箱培养，待培养成熟后，再接入三角瓶培养。 ②三角瓶液体培养（摇瓶种子） 第6页，共25页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 * 第7页，共25页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 * 2.生产车间种子制备 ☆（1）种子罐级数的确定 指制备种子需逐级扩大培养的次数。 ◆种子罐级数主要决定于菌种的生长特性，孢子发芽及菌体生长繁殖速度，以及所采用的发酵罐容积。 ◆种子制备目的 形成一定数量和质量的菌体。孢子发芽和菌体开始繁殖时，菌体量很少，在小型罐内即可进行。 ◆发酵目的 获得大量的发酵产物。产物是在菌体大量形成并达到一定生长阶段后形成的，需要在大型发酵罐内才能进行。同时许多发酵产物的产生菌，其不同的生长阶段对营养和培养条件的要求有差异。 第8页，共25页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 * ◆生长缓慢的菌种，如果没有经过多级种子扩大培养就接种到发酵罐，将延长发酵周期，使生产能力下降。进行多级种子扩大培养后再移种至发酵罐是工业化生产所必须的。 ◆种子罐级数越少，越有利于简化工艺和控制，并减少由于多次转种而带来的染菌机会。 第9页，共25页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 * 种子罐工艺控制： ①孢子量； ②罐温； ③罐压；④通气量； ⑤搅拌 ⑥pH、离心等参数控制； ⑦种龄；⑧培养基； ⑨灭菌及降温时间 第10页，共25页，2022年，5月20日，14点54分，星期五 * ☆（2）接种量的确定 ◆与该菌在发酵罐中生长繁殖的速度、种子质量和发酵条件等有关。 a.接种量过多，菌丝生长过快、过稠，培养液粘度增加，营养基质缺乏或溶解氧不足，影响产物的合成。 b.接种量过小，引起发酵前期菌体生长缓慢，使发酵周期延长，菌丝量少，还可能产生菌丝团，导致发酵异常。 生产上多以大接种量和丰富培养基作为高产措施 多数抗生素发酵接种量为7％～15