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2022调节巨噬细胞与动脉粥样硬化斑块消退的因素（全文） 动脉粥样硬化心血管疾病（ASCVD ）包括缺血性心脏病、缺血性脑血 管疾病和外周血管疾病。ASCVD是目前危害人类最严重的一种疾病，因 为心血管疾病是世界范围内第一大死亡原因。如何预防和消灭ASCVD已 经成为几代人的梦想。从ASCVD消退的小鼠模型可以观察到通过降低血 循环中的致动脉粥样硬化血脂水平，如低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C ）, 调节低密度脂蛋白受体（LDLR ）、降低膳食中的胆固醇就可以使动脉粥样 硬化斑块的体积缩小或巨噬细胞数量降低。因此，斑块内巨噬细胞数量是 斑块发展和消退的一个标志物。斑块内巨噬细胞数量的增加代表斑块进 展，而斑块内巨噬细胞数量减少则反映出斑块的消退。影响斑块内巨噬细 胞数量的因素都可以影响动脉粥样硬化的消退和逆转。探明这些影响因素 就可以找到逆转动脉粥样硬化斑块的新的靶点和药物。 1、巨噬细胞转移（Macrophage Trafficking ） 斑块内巨噬细胞的迁移是小鼠动脉硬化消退模型中的动脉粥样硬化 消退的特征口-3］。降脂治疗可以使斑块内的巨噬细胞、细胞骨架结合和 Rho GTPase基因显著降低［4］。主动脉移植模型中显示的斑块巨噬细胞 含量的减少是通过趋化因子受体7型（CCR7 ）介导的巨噬细胞向淋巴结 的排出增加［5］。巨噬细胞CCR7转录物的表达部分受苗醇反应的调节, 是启动巨噬细胞转移的一个元素。因此，降脂治疗可以诱导斑块CCR7 的表达和巨噬细胞的迁移⑹。在缺乏LDLR相关蛋白1 （LRP-1 ）的小鼠 中，一项独立的研究提供了 CCR7在消退中作用的证据。在动脉粥样硬化 消退过程中，LRP-1缺乏会增加巨噬细胞胆固醇流出和CCR7表达，并促 进巨噬细胞迁移到淋巴结和斑块消退［7］。 表观基因组指导的ASCVD消退过程中，斑块内巨噬细胞转录组的分 析揭示了 Writ信号通路的激活［4］。鉴于在巨噬细胞中,Wnt信号通过0 -连环蛋白依赖性机制促进细胞运动［8］,并且敲除了 3连环蛋白可促进动 脉粥样硬化进展［9］,该途径可能代表ASCVD消退尚未探索的调节因子。 此外，巨噬细胞滞留因子netrin 1和sem叩horin 3E ,在进展和消退斑 块中受到不同转录物的调节，也有望成为斑块内巨噬细胞含量的潜在影响 因素，因为它们能够调节进展斑块中的巨噬细胞滞留和迁移［10-11］。 监测斑块内巨噬细胞通量是评估旨在促进ASCVD消退疗法的一个有效性重要组成部分。小鼠消退研究中最容易使用的技术是利用单核细胞吸 收荧光团标记珠子的能力（例如，Rahman等［12］、Nagareddy等川、 Distel等［2］和Potteaux等［13］）。单核细胞珠标记技术可用于监测斑 块内单核细胞进入和巨噬细胞排出［14］。为了监测斑块内巨噬细胞的进入 （诱导斑块进展），在监测小鼠前（通常24?72小时）静脉内注射多种 蛋白预偶联磁珠。为了监测斑块内巨噬细胞的排出（诱导消退），在监测 小鼠前（通常为24?96小时）注射多种蛋白预偶联磁珠。在对斑块中 的含珠细胞进行量化，可以评估单核细胞和巨噬细胞的移动。 这种技术代表了一种相对快速和直接的标记程序，并且不会改变带有珠子的细胞的表型口 5］。这种方法的主要缺点是珠子与循环单核细胞的结 合率相对较低（*5%?10% ）和选择性Ly6Clo单核细胞在吸收珠子时， 单核细胞亚群进入病灶的能力降低。事先给小鼠注射氯瞬酸盐脂质体以消 耗所有循环单核细胞,可能会使珠子标记偏向Ly6Chi亚群［16］。然而, 由于它们能够消耗脾脏、骨髓和肝脏中的巨噬细胞群，因此存在潜在消耗 斑块巨噬细胞的固有缺点［17］。或者，Ly6chi单核细胞可以用修饰的胸 苜类似物5-乙焕基-2,脱氧尿苜（EdU ）标记，在不到72小时的时间点 选择性地掺入Ly6Chi子集［13］。Ly6chi单核细胞通过EdU染色确定 进入斑块的。使用增殖标记Ki67进行双重染色可以区分募集的单核细胞 和原位增殖的巨噬细胞。 荧光报告线（例如，绿色荧光蛋白CD68 ［GFP-CD68］, CX3C趋化 因子受体1绿色荧光蛋白［CX3CR1-GFP］）和同类小鼠（例如，CD45.1、 CD45.2）也可以监测斑块单核细胞/巨噬细胞转运［16］。这些模型的效用 最适合在移植模型中进行的消退研究，因为这允许对供体斑块细胞或受体 循环细胞进行差异标记，以评估消退介导的变化。利用可在消退时触发的 可诱导报告系（例如，CreloxP或翻转酶/翻转酶识别目标［FLP-FRT］系统） 也代表了在无移植消退模型中跟踪骨髓细胞运输的可行方法。荧光报告线 代表了通过活体成像监测单核细胞/巨噬细胞通量的有用模型。然而，相对 较短的监测窗口和需要暴露感兴趣的部位以