菌种分离筛选 课件.pptVIP

二、分离 目的微生物不纯，需分离纯化。采用简便迅速，有一定准确性的检出方法，提高筛选效率。常用平皿反应法： 纸片培养显色法：浸有指示剂滤纸。 透明圈法：混浊底物被分解后形成透明圈。如可溶性淀粉、碳酸钙等。变色圈法：直接用显色剂或指示剂。生长圈法：利用某些具有特殊营养要求的微生物作为工具菌，要分离的微生物能在一般培养条件下生长而合成该营养物而使工具菌能生长，形成生长圈。抑制圈法：琼脂块培养法。 * . 用刚果红染色法鉴定筛选降解纤维素的菌株 羧甲基纤维素钠作培养物 抗生素筛选 检定菌培养，加上发酵液 * . 五、放线菌的分离培养基的组成原则 大多数放线菌的分离培养是在贫脊或复杂底物的琼脂平板上进行的。除嗜温性放线菌外，其他放线菌一般在培养4-20天内在分离平板上缓慢形成菌落。 在放线菌分离琼脂中通常都加入抗真菌剂制霉菌素或放线菌酮，以抑制真菌的繁殖。 选择性地添加抗生素。 分离琼脂平板制备好后，一般皆应在37℃培养箱中存放3天。 * . 放线菌的分离 土样中放线菌的非选择性分离：土样风干，磨碎，无菌海绵压印土样后压印平板后培养。 植物体上放线菌的分离：无菌取植物组织，干燥以减少细菌数量，剪碎植物材料后植入平板表层后培养。也可洗下微生物后振荡培养。 水中放线菌的分离： 为使所要分离的放线菌的数量种类增多，一般将水样离心或滤纸过滤，取离心沉积或滤纸表面沉积进行系列稀释和涂布。 * . 次代培养及纯化 菌落形成后可根据肉眼可见的菌落形态上的差异，作初步的鉴定和区分。 通过高倍放大进行镜检，可了解气生和营养孢子形成情况。 成功地分离出各种不同的放线菌属及种的关键是所采集样本的本身及其分离用的琼脂培养基；而肉眼识别不同的生长形态、从而初步地加以鉴定，在分离放线菌时显得尤为重要。 将分离平板上所形成的菌落用经火焰灼烧灭菌的钩形针或无菌牙签挑取，点接到琼脂平板上进行影印培养，以进一步筛选和分离。 * . 放线菌菌落形态 * . 六、真菌分离 1、利用低碳／氮比的培养基可使真菌生长菌落分散，利于计数，分离和鉴定。这里主要是利用营养成分的减少而使生长减慢，并由此限制真菌的迁徙生长。 2、改变培养温度将有利于不同嗜温区真菌的分离。 3、有时，真菌子实体形成必须有光线，这在分离培养时应加以考虑。 * . 4、选择性富集：是通过一定的方式使样本中一种或一群微生物数量上的增加而利于分离的一种技术。 富集可以是种水平的，如通过营养要求的改变来富集分离镰刀菌；也可以是组成群水平的，如以纤维素为唯一碳源的选择性培养基可选择性富集所有能降解纤维素的纤维素裂解微生物。 5、在分离培养基中加入一定的抗生素即可有效地抑制细菌生长及菌落形成。 * . 第六章 微生物菌种的分离筛选 第一节 菌种分离的总体设计 第二节 分离样本的采样 第三节 含微生物样品的富集培养 第四节 微生物的培养分离 * . 第一节 菌种的分离简介 一、菌种的来源 根据资料直接向有科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏部门索取或购买； 从大自然中分离筛选新的微生物菌种。 * . 二、分离思路 新菌种的分离是要从混杂的各类微生物中依照生产的要求、菌种的特性，采用各种筛选方法，快速、准确地把所需要的菌种挑选出来。 实验室或生产用菌种若不慎污染了杂菌，也必须重新进行分离纯化。 有了优良的菌种，还要有合适的工艺条件和合理先进的设备与之配合。 * . 定方案：首先要查阅资料，了解所需菌种的生长培养特性。 采样：有针对性地采集样品。 增殖：人为地通过控制养分或培养条件，使所需菌种增殖培养后，在数量上占优势。 分离：利用分离技术得到纯种。 发酵性能测定：进行生产性能测定。这些特性包括形态、培养特征、营养要求、生理生化特性、发酵周期、产品品种和产量、耐受最高温度、生长和发酵最适温度、最适pH值、提取工艺等。 三、新种分离与筛选的步骤 * . 菌种筛选主要步骤 调查研究及查阅充分的资料 ↓设计实验方案 ↓确定采集样品的生态环境 采样 ↓确定特定的增殖条件 增殖培养 ↓确定特殊的选择培养基及可能的 ↓定性或半定量快速检出法 平板分离 ↓ * . 原种斜面 ↓确定发酵培养基础条件 筛选  ↓ 初筛（1株1瓶） ↓ 复筛（1株3～5瓶） ↓结合初步工艺条件摸索 再复筛（1株3～5瓶） ↓ 3～5株 ↓单株纯种分离 ↓ 生产性能试验 ↓→毒性试验菌种鉴定 * . 第二节 分离样本的采样 1、采样对象 以采集土壤为主。 一般园田土和耕作过的沼泽土中，以细菌和放线菌