药用植物栽培技术(第3版)PPT课件-ER-s-5实训五-种子生活力测定.pptx

药用植物栽培技术实训五 种子生活力测定南阳医学高等专科学校 赵鑫一、实训目的要求掌握种子生活力快速测定的各种方法。二、实训材料用品实训材料：本地区常见药用植物种子3～5种。实训用品：种子检验板、烧杯、解剖刀、镊子、放大镜、显微镜、培养皿、解剖针、温箱、紫外光灯、表面玻璃、滤纸、白纸（不产生荧光的）、0.2%～0.5%TTC溶液（TTC可直接溶于水，溶于水后，呈中性，pH7±0.5，不宜久藏，应该随用随配）、0.05%～0.2%靛红溶液或5%红墨水，宜随配随用、碘-碘化钾溶液（把1.3g碘化钾溶解在水中，再加入0.3g结晶碘，然后定容至100ml）。三、实训内容方法（一）红四氮唑（TTC）染色法1．实验样品的数取。每次至少测定200粒种子，从充分混合的净种子中随机数取每重复100粒或少于100粒的若干副重复。2．种子的预措预湿。预措是指有些种子在预湿前须除去种子的外部附属物（包括剥去果壳）和在种子非要害部位弄破种皮。预湿是为了加快充分吸湿、软化种皮，便于准备样品，以提高染色的均匀度而在染色前对种子进行的处理。根据种的不同，预湿的方法有所不同，一种是缓慢润湿，即将种子放在纸上或纸间吸湿，它适用于直接浸在水中容易破裂的种子，以及许多陈种子和过分干燥种子；另一种是水中浸渍，即将种子完全浸在水中，让其达到充分吸胀，它适用于直接浸入水中而不会造成组织破裂损伤的种子。如萝卜子需纸间预湿5～6h或在30℃温水中浸泡3～4h，小茴香需在20～30℃水中浸泡3h。三、实训内容方法（一）红四氮唑（TTC）染色法3．染色前准备。为了使胚的主要构造和活的营养组织暴露出来，便于四氮唑溶液快速而充分地渗入和观察鉴定，经软化的种子应进行样品准备。具体准备方法因种子构造和胚的位置不同而异，如伞形科种子近胚纵切。4．染色。在已准备好的种子中加入适宜浓度的四氮唑溶液以完全淹没种子，移置一定温度的黑暗控温设备内或弱光下进行染色反应。所需染色时间因四氮唑溶液浓度、温度、种子种类、样品准备方法等因素不同而有差异。一般来说，四氮唑溶液浓度高，染色快；温度高，染色时间短，但最高不超过45℃。到达规定时间或染色已很明显时，倒去四氮唑溶液，用清水冲洗种子。三、实训内容方法（一）红四氮唑（TTC）染色法5. 鉴定前准备。为便于观察鉴定和计数，将已染色的种子样品加以适当处理使胚主要构造和活的营养组织明显暴露出来，如一些种子会沿胚中轴纵切，一些会剥去种皮和内膜等。6. 观察鉴定大中粒种子可直接用肉眼或手持放大镜观察，小粒种子最好用10～100倍显微镜观察。观察种胚被染色的情况，凡种胚全部或部分被染成红色的即为具有生命力的种子，种胚不被染色的为死种子。如果种胚中非关键性部位（如子叶的一部分）被染色，而胚根或胚芽的尖端不染色，都属于不能正常发芽的种子。三、实训内容方法（二）靛红染色法步骤同TTC染色法：注意事项 1．染料的浓度要适当，染色时间不能太长（如用红墨水染色，只需要5～10分钟即可），否则不容易区别染色与否。 2．靛红染色法测定种子生活力，适用于豆类、麻类、瓜类、十字花科、果树、乔灌木种子的生活力测定。三、实训内容方法（三）碘化钾反应法1．将种子在水中浸18h。2．取出种子放在垫有湿滤纸的培养皿内，将培养皿置30℃恒温箱中，不同植物种子放置时间不同，如松种子放48h，落叶松放72h。3．用刀片把胚部切下，然后浸入碘-碘化钾溶液中20～30min后，取出胚用水冲洗12min，然后在垫有白纸的玻璃板上进行观察。4．鉴别种子生活力的标准：有生活力的种子的胚部全部染成不同程度的黑色或灰色，或者胚根部呈褐色，子叶为黄色。无生活力种子的胚部全部染成黄色，或子叶呈灰色或黑色，胚根呈黄色，或胚根末端呈黑色或灰色，而其他部分呈黄色。5．此法适于松属、云杉属和落叶松属的种子生活力测定。三、实训内容方法（四）剥胚法将种子在清水中浸泡24h，使种皮软化，切开种皮，有胚乳的种子，还须将胚乳切开，用解剖刀和解剖针小心地取出胚。放在铺有湿润滤纸的培养皿内，每皿50粒，重复一次，放在20～25℃的温箱中，经2～10天后即可观察胚的生长情况。有生活力的胚在这段时间仍然坚实而呈白色，开始生长或转变为绿色；而死胚则变色腐烂。离体胚测定和TTC法测定一样比普通测定要快，但取胚时胚较易受伤。该法适于测定长度大于5mm种子的生活力。三、实训内容方法（五）荧光法1．直接观察法这种方法适用于禾谷类、松柏类及某些蔷薇科果树的种子生命力的鉴定，但种间的差异较大。用刀片沿种子的中心线将种子切为两半，使其切面向上放在无荧光的白纸上，置于紫外光灯下照射并进行观察、记载。有生活力的种子在紫外光的照射下将产生明亮的蓝色、蓝紫色或蓝绿色的荧光；丧失生命力的死种子在紫外光照射下多呈黄色、褐色以至暗淡无光，并带有多种斑点。随机选取20粒待测