原生质体的培养与融合.pptxVIP

原生质体的培养与融合; 原生质体(Protoplast);微 丝;第一节 原生质体分离及纯化;多数植物分离原生质体的经典材料-----叶肉细胞。;;1、机械分离法(Machanical isolation);(1)酶的种类;;(2)酶液的配制;(3)分离原生质体;图示原生质体分离过程(以叶片为例);叶片;二、 原生质体纯化与活力测定;1、 离心沉淀法;2、漂浮法; 3 、 界面法;(二) 原生质体活力测定;第二节 原生质体培养;二、培养方法;;定义:原生质体融合也叫做体细胞杂交,使分离出来的不同亲本的原生质体,在人工控制条件下,相互融合成一体,形成杂种细胞,并进一步发育成杂种植株的技术。;原生质体融合;一、原生质体融合意义;;番茄+马铃薯;二、融合方法;(一)无机盐诱导融合: NaNO3法; ;PEG法特点:;PEG法原理;;最为常用。 具体做法:在无菌条件下混合双亲原生质体----滴加PEG溶液,摇匀,静置---滴加高钙-高pH溶液,摇匀,静置---滴加原生质体培养液洗涤数次---离心获得原生质体细胞团---筛选---再生杂合细胞;(五)电融合技术;电融合法原理;施加直流电场后,形成串珠的原生质体在质膜接触处发生穿孔,开始遗传物质的交流。;原生质体的融合过程:;三、体细胞杂种细胞筛选与鉴定;;异硫氰酸荧光素(FITC):绿色 异硫氰酸罗丹明(RITC):红色;四、体细胞杂种植株的鉴定;4-1、形态学鉴定;感谢您的聆听！