- 1、本文档共9页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
ICS 01.040.65
CCS B 16
34
安 徽 省 地 方 标 准
DB34/T 4198—2022
梨黑斑病菌的LAMP检测方法
Detection of Alternaria species involved in pear black spot using LAMP
2022-06-29发布
2022-07-29实施
安徽省市场监督管理局 发 布
DB34/T 4198—2022
前 言
本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定
起草。
请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
本文件由安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所提出。
本文件由安徽省农业农村厅归口。
本文件起草单位:安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所、巢湖市农机管理中心、安
徽省农业科学院园艺研究所、怀远县农业技术推广中心。
本文件主要起草人:杨雪、谷春艳、潘锐、翟承勋、徐会永、臧昊昱、戚仁德、高正辉、齐永杰、
王同岁。
I
DB34/T 4198—2022
梨黑斑病菌的LAMP检测方法
1 范围
本文件规定了梨黑斑病菌的 LAMP 检测方法。
本文件适用于梨黑斑病菌检测的组织和人员。
2 规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,
仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本
文件。
GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
梨黑斑病 pear black spot
由链格孢类(Alternaria spp.)真菌引起的一种重要病害,已报道病原菌主要包括Alternaria
gaisen K. Nagan、A. alternata (Fr.) Keissler、A. tenuissima (Fr.) Wiltsh、A. infectoria、
A. yaliinficiens R. G. Roberts 和 A. ventricosa R. G. Roberts。
4 方法原理
根据梨黑斑病病原菌的 cytb 序列设计的特异性引物进行 LAMP(Loop - mediated isothermal
amplification, 环介导等温扩增技术)检测作为判断梨黑斑病菌的依据。
5 仪器设备
高速离心机:转速≤15000 r/min
涡旋振荡器
恒温金属浴
光照培养箱:20℃~30℃
超低温冰箱:-80℃
电泳仪
凝胶成像仪
可调移液器:1-10 μL,10 μL-100 μL,100 μL-1000 μL
6 试剂和培养基
1
DB34/T 4198—2022
培养基
WA 培养基(琼脂粉 20 g,加水 1000 mL),PDA 培养基(去皮马铃薯 200 g,蔗糖(或葡萄糖)
20 g,琼脂粉 20 g,加水补足至 1000 mL)。
DNA提取试剂
2% CTAB 提取液(100 mmol/L Tris-HCl (pH 8.0),20 mmol/L EDTA,1.4 mol/L NaCl,2% (w/v)
CTAB,40 mmol/L 巯基乙醇(用时加入)),无水乙醇,10% SDS,酚/氯仿/异戊醇 (25:24:1),氯仿,
异丙醇,TE(10 mmol/L Tris-HCL (pH 8.0),1 mmol/L EDTA)。
LAMP检测试剂
Bst DNA 聚合酶,甜菜碱(Betaine),显色剂 SYBR Green I,TAE 电泳缓冲液 (Tris 4.84 g,
Na2EDTA·2H20 0.75 g,冰乙酸 1.142 mL,加水至 1000 mL,pH 8.5),琼脂糖。
除另有规定外,所有试剂均为分析纯或生化试剂,实验用水符合 GB/T 6682 中三级水的标准。
7 检测方法
病原菌分离与纯化
将梨病果用 75%乙醇表面消毒 30 s 后,于病健交界处取少量组织置于 WA 培养基中 28℃培养。
待长出菌丝后,切取一小块放在 PDA 培养基中于培养 7 d 左右,收集菌丝于 4℃备用。
供试DNA提取
7.2.1 CTAB法:取少量菌丝粉,加入900 μL 2% CTAB提取液和 90 μL 10%SDS,涡旋混匀,于60℃
水浴 1 h,期间每隔 10 min上下颠倒几次。常温条件下 12000 rpm离心 10 min;取上清,加入等体
积酚/氯仿/异戊醇(25:24:1),颠倒混
您可能关注的文档
- DB34∕T 635-2022 地理标志产品 铜陵白姜.docx
- DB34∕T 1363-2022 饲料中喹烯酮的测定 高效液相色谱法.docx
- DB34∕T 1376-2022 鸡蛋中氟苯尼考残留量的测定.docx
- DB34∕T 2106-2022 棘胸蛙养殖技术规程.docx
- DB34∕T 2107-2022 棘胸蛙人工繁殖技术操作规程.docx
- DB34∕T 4195-2022 植保无人飞机防治小麦赤霉病施药技术规程.docx
- DB34∕T 4196-2022 饲料生产环节防控非洲猪瘟技术规范.docx
- DB34∕T 4197-2022 玉米田草地贪夜蛾绿色防控技术规程.docx
- DB34∕T 4199-2022 小麦、玉米连作主要病虫害全程绿色防控技术规程.docx
- DB34∕T 4200-2022 动物及动物产品运输车辆洗消中心建设与运行技术规程.docx
文档评论(0)