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地黄SCoT分子标记体系的建立和指纹图谱的构建 　　摘要：該研究采用l25（56）正交设计和单因素两种方法，对影响地黄scot-pcr反应的5个因素（模板dna浓度，引物浓度，ddh2o和mix的用量以及退火温度）进行了优化。结果表明：优化后的反应体系总体积为25μl，含有8μlddh2o，1μl模板dna（80ng·μl-1），1μl引物（8μmol·l-1）和15μlmix，退火温度为45℃。运用30份地黄种质材料，对优化的scot-pcr正交体系进行多次重复验证，获得了多态性丰富、条带清晰的扩增图谱，证明该反应体系稳定可靠。利用该体系对32条scot引物进行两次筛选，得到14个扩增产物清晰、重复性好且多态性条带相对较高的引物。利用scot4等5条引物构建了上述地黄2个种共30份种质的scot指纹图谱。利用这5个scot引物指纹图谱可将7个地黄常用栽培品种区分开。这表明scot分子标记体系适用于地黄主要品种亲缘关系及遗传多样性的研究，所构建的指纹图谱也为地黄常见的7个栽培品种的区分提供参考依据。 　　关键词：目标起始密码子多态性（scot），单因素试验，正交设计，引物筛选，品种鉴定 　　中图分类号：q949.9，o413 　　文献标识码：a 　　文章编号：1000-3142（2019）05-0608-07 　　scotmolecularmarkersystemandfingerprintinrehmanniaglutinosa 　　yangke1，zhouyanqing1，2，3*，duanhongying1，guomengmeng1 　　（1.collegeoflifesciences，henannormaluniversity，xinxiang453007，henan，china;2.keylaboratoryformicroorganismsandfunctionalmolecules，henannormaluniversity，xinxiang453007，henan，china;3.engineeringtechnologyresearchcenterofnursingandutilizationofgenuinechinesecrudedrugs，henannormaluniversity，xinxiang453007，henan，china） 　　abstract：weusedl25（56）orthogonaldesignandsinglefactormethodtooptimizethefivefactors（templatednaconcentration，primerconcentration，ddh2o，mixamountandannealingtemperature）thataffectthescot-pcrreactionofrehmanniaglutinosa.theresultswereasfollows：thereactionsystemwasatotalvolumeof25μlcontaining8μlofddh2o，1μloftemplatedna（80ng·μl-1），1μlofprimer（8μmol·l-1）and15μlofmix，andanannealingtemperatureof45℃.theoptimizedscot-pcrorthogonalsystemwasrepeatedlyverifiedbyusing30partsofrehmanniagermplasmmaterials，andtheamplifiedspectrumwithrichpolymorphismandclearbandswasobtained，whichprovesthatthereactionsystemisstableandreliable.usingthissystem，32scotprimerswerescreenedtwice，and14primerswithclear，reproducibleandrelativelyhighpolymorphicbandswereobtained.finally，scotfingerprintsof30speciesoftheabovetwospeciesofrehmanniawereconstructedbyusingfiveprimerssuchasscot4.usingthesefivescotprimerfingerprints，sevencommoncultivarsofrehmanniaglutinosacanbedistinguished.thestudyindica