细菌内毒素检测 5、动态显色法鲎试验及其在药品生产质控上的应用.pdfVIP

动态显色法鲎试验及其在 药品生产质控上的应用 •湛江安度斯生物有限公司 •2016年6月 实验助手APP授权发布 1 一、药典接受的鲎试验方法 限度试验 凝胶法 （Gel-clot） 半定量试验 细菌内毒素检查法 （BET） 动态浊度法 浊度法 (KTA) 终点浊度法 光度法 (ETA) （Photometry） 动态显色法 显色法 (KCA) 终点显色法 (ECA) 2 二、动态显色法鲎试验的原理与特点 1. KCA鲎试验原理 内毒素 凝固酶原 凝固酶 显色寡肽 寡肽 + pNA（黄色） 动态法光度分析 3 显色寡肽：一种人工合成的三肽或四肽，俗称鲎三 肽或鲎四肽，又称显色基质或显色底物。寡肽的末 端连接着一个成分为对硝基苯胺（pNA ）的显色基 团。 在无凝固酶状态时，含有显色寡肽的溶液是无色透 明的。当溶液含有内毒素，内毒素激活鲎凝固酶原 成为凝固酶，凝固酶会特异性地切断连接显色基团 的肽链，使显色基团与显色寡肽分离。游离的显色 基团呈黄色。 使用动态光度仪分析反应溶液的光度变化，可以定 量地测定溶液中的内毒素含量。通常使用405nm光 源进行光度分析。 4 2.KCA鲎试验特点 灵敏度高 在所有的鲎试验方法中，KCA鲎试验的灵敏 度最高。 在常规的鲎试验条件下（37℃/60分钟）， KCA鲎试验的灵敏度可达0.005EU/mL。 灵敏度高的原因在于显色寡肽的应用。 5 检测范围广 在所有的鲎试验方法中，KCA鲎试验的检测 范围最广。 在常规的鲎试验条件下，KCA的检测范围可 达10,000倍（50~0.005EU/mL），标准曲 线相关系数|r|≥0.998。 线性是衡量检测能力的重要指标。 KCA线性好的原因同样在于显色寡肽的应用。