转录及其调控 (2).pptVIP

关于转录及其调控 (2);遗传信息由DNA转换到RNA的过程。 蛋白质生物合成的第一步: 合成mRNA以及非编码RNA（tRNA、rRNA等）;多核苷酸链的合成都是以5’→3’的方向. 转录特点： （1）对于一个基因组来说，转录只发生在一部分基 因，而且每个基因的转录都受到相对独立的控制 （2）转录是不对称的. (3）转录时不需要引物，而且RNA链的合成是连续的。;一、所需因素;模板链,又称反义链 编码链，又称有义链 ;2.RNA聚合酶（RNA polymerase） RNA聚合酶有以下特点： （1）无需引物的存在能独自起始新RNA链 的合成 （2）没有校对能力； （3）催化的底物是核糖核苷三磷酸。 ; 大肠杆菌只有一种RNA聚合酶，负责所有rRNA、mRNA和tRNA的合成。该酶具有全能性，基本上不需要其他蛋白因子的参与，即可独立的进行。 功能： （1）识别DNA双链上的启动子 （2）通过阅读启动子序列，确定转录方向和模板链 （3）解开DNA部分双螺旋，产生约17 bp的单链DNA模板 （4）选择正确的核糖核苷三磷酸（rNTP）底物并催化形成磷 酸二酯键，使合成的RNA链不断延伸。 （5）最后当它达到终止子时，识别转录终止信号，停止转录。;结构： 5种亚基组成：两个α亚基、1个β亚基、1个β′ 亚基 和1个δ亚基。 转录的起始阶段： δ亚基和核心酶（ α2ββ′）组装成全酶共同起作用。δ亚基无催化活性，但它能识别启动子并将封闭的启动子复合物转换成开放状态。 一旦转录起始，δ亚基就从全酶上脱离下来。核心酶与模板DNA结合的亲和力弱，特异性差，这有利于它在模板链上移动，促进转录延伸。 ;σ因子负责识别启动子的保守序列，不同的σ因子识别不同的启动子。 许多细菌能产生多种可取代的σ因子，以识别不同的启动子。;一些抗生素，如利链菌素，可以抑制原核生物的RNA聚合酶，使得原核生物的基因无法转录成mRNA，从而达到杀死细菌等原核生物的效果。 ;1.转录起始 全酶与模板的DNA接触，生成非专一的，不稳定的复合物在模板上移动。 2.起始识别：全酶与-35序列结合，产生封闭的酶-启动子二元复合物。 3.全酶紧密地结合在-10序列处，DNA模板局部变性，形成开放的启动子二元复合物。（RNA聚合酶与启动子结合后造成约10bp的DNA解链） 4.合成短多聚核苷酸（10nt),三元复合物形成。（酶-启动子-NTP） 5. σ因子从全酶中解离下来，聚合酶转变为延长构型。酶分子与启动子特异性结合性的结合力下降，延伸阶段开始。 ;第12页，共26页，2022年，5月20日，9点48分，星期六;转录延长;第14页，共26页，2022年，5月20日，9点48分，星期六;三、转录的终止;不依赖ρ因子终止作用： 在转录终止点之前有一段回文序列，回文序列的两个重复部分之间由几个碱基对的不重复阶段隔开;依赖于ρ因子终止作用 ρ因子是55KDa蛋白，其活性形式为六聚体 1）促进转录终止活性 2）NTPase活性，需要RNA链。 ;两类终止子有共同的序列特征。在转录终止点前有一段回文序列。回文序列的两个重复部分(每个7～20bp)由几个不重复的bp节段隔开。回文序列的对称轴一般距转录终止点16～24bp。 　　两类终止子的不同点是：不依赖ρ因子的终止子的回文序列中富含GC碱基对，在回文序列的下游方向又常有6～8个AT碱基对(在模板链上为A、在mRNA上为U)；而依赖ρ因子终止子中回文序列的GC对含量较少。在回文序列下游方向的序列没有固定特征，其AT对含量比前一种终止子低。 ;转录终止： 当RNA链延伸到转录终止位点时，RNA聚合酶不再形成新的磷酸二酯键，RNA-DNA杂合物分离，转录泡瓦解，DNA恢复成双链状态，而RNA聚合酶和RNA链都被从模板上释放出来。 ;转录单元是一段被转录成单链RNA的DNA序列，它起始于启动子，结束于终止子。 一个转录单元可能包含不止一个基因。 ;一、所需因素 转录起始需要启动子，RNA聚合酶和转录因子参与。 1.转录起始前的上游区具有启动子核心序列。不同物种、不同细胞或不同的基因转录起始点上游有不同的DNA序列，统称为順式作用元件（cis-acting element). 順式作用元件包括启动子、启动子上游元件等近端调控元件和增强子等远隔序列。;起始点上游多数有共同的TATA序列，称为TATA盒。（启动子核心序列） 启动子上游元件是位于TATA盒上游的DNA序列，多在转录起始点约-40~-100nt的位置，常见的是GC盒和CAAT盒。 增强子-能够结合特异基因调节蛋白，促进邻近或远隔