基因突变类型、损伤修复.pptVIP

2.1.3 微阵列分析1 DNA微阵列（Microarray assay）或 DNA芯片（DNA chip）技术研究所使用的基本硬件：是基因微阵列或基因芯片，其上含有成千上万个寡聚核苷酸片段或cDNA探针（cDNA、EST或基因特异的寡核苷酸）。这些探针按一定顺序以矩阵方式排列在载玻片大小的塑料或玻璃板上，在1cm2面积上可有1-10万个不同的排列，并可有多个拷贝，其敏感性可达1-5个拷贝mRNA/细胞。 基因表达测定：先将受试动物染毒，其靶器官或细胞与毒物接触后，发生反应或被活化的基因会产生mRNA。然后将mRNA用核素或荧光素标记，再加入基因芯片。在单个的阵列中加入两种标记样品进行杂交，再用图象分析仪或激光扫描显微镜进行检查和分析。根据发生结合反应发生的情况便可判断哪些基因发生了改变。 2.1.3 微阵列分析2 优点：灵敏度高，mRNA丰度低至10万分之一仍能被检出。可采用几种不同颜色的荧光染料标记探针，这样在同一张阵列膜上进行一次杂交实验就可分析不同样品间基因表达的差异，因此效率高。 缺点：成本较高，需要特殊的信号检测分析系统（图象分析仪或激光扫描显微镜），玻片上的微阵列不能重复使用。 2.1.4 RNA干涉技术 RNAi(RNA interference)是一种能快速有效地沉寂靶基因的表达，进而从反向角度来阐明基因的功能。 原理：是外源性双链RNA导入细胞后，可产生21-23nt（核苷酸，nucleotide）长度的小分子干涉RNA（small interference RNA, siRNA），引起与其序列同源的特异基因mRNA降解的现象-转录后的基因沉默（post-transcriptional gene silencing,PTGS） 实验步骤：选取目的基因；设计相应的siRNA序列；制备siRNA； siRNA转染哺乳动物细胞；RNAi效果分析。其中关键是设计相应的siRNA序列。 2.1.5 单核苷酸多态性检测 SNPs（single nucleotide polymorphisms）指染色体基因组水平上单个核苷酸变异引起的DNA序列多态性。其类型有单碱基的转换、颠换、插入、缺失等。 最普遍的检测方法：定位的序列标签位点和表达序列标签进行测序。 2.2 蛋白质组学技术 双向凝胶电泳：是将细胞抽提物在电泳过程中，依据蛋白质所带电荷及分子大小而被分离的技术。 生物质谱：是使样品分子离子化后，根据不同离子间质荷比（M/Z）的差异来分离并确定相对分子量的技术。 多向蛋白鉴定技术：是将蛋白质酶解后得到多肽混合物，进样到强阳离子交换色谱柱，直接洗脱后进样到反向LC色谱柱上，然后进行梯度洗脱，用MS/MS对分离的馏份进行鉴定。 同位素亲和标签技术：是用化学性质相同而质量不同的两种同位素分子，对蛋白样品的半胱氨酸进行标记，然后对混合的样品进行质谱分析，通过比较质谱峰的强弱可对蛋白质进行定量比较。 分子扫描技术：是将双向凝胶转到涂有酶解液的膜上，在转膜的同时进行酶切，再利用质谱扫描鉴定。 2.3 代谢组学技术 核磁共振：其可在一次单独的检测中获得生物体液中成百上千的代谢物组分的信息，而无需预先确定被检测物质的性质。包括： 氢谱：其可检测含氢的化合物，但其大分子信号会掩盖小分子化合物的信号。 碳谱：可用于检测分子量在500D以下的含碳有机化合物的信息。 色谱-质谱联用：包括LC-MS和GC-MS。其速度快、灵敏度高、样品处理简单。 毛细管电泳：分离样品速度更快、效率高。 基 因 突 变 P奥赛经典126 基因突变的类型 1. 碱基对的置换 是指：DNA分子中一个碱基对被另一碱基对所取代，又称点突变。 转换：两种嘧啶之间互换，或两种嘌呤之间互换。 颠换：嘌呤与嘧啶之间互换。 （更常见） 蛋白质 氨基酸 异常 正常 谷氨酸 缬氨酸 mRNA DNA A A G T T C A T G T A C A G A G A U G C G mRNA C G C G C G DNA 精 氨基酸 G C U mRNA C G A G C T DNA 精 氨基酸 同义突变：三联体密码子突变成决定同一个氨基酸的密码子。 讲到此处 Fri 错义突变：三联体密码子发生突变导致蛋白质中原来的氨基酸被另一种氨基酸取代。 无义突变：三联体密码子突变为终止密码子。它导致翻译提前结束而使产物失活。 2. 移码突变 是指：由一个或多个非三整倍数的核苷酸插入或缺失，而使编码区该位点后的三联体密码子阅读框架改变，导致后向氨基酸都发生错误。 通常该基因产物会完全失活；如出现终止密码子则使翻译提前结束。 3. 密码子的缺失或插入 是指：决定一个氨基酸的三个核苷酸同时缺失或增加。这