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（一）样品的采集 1．血样 血样浓度与作用点的浓度密切相关，可以反映靶器官的浓度。 血细胞 血浆（plasma） 血小板 血清（serum） 血细胞 测定血样中平均分布于细胞内和细胞外的药浓 抗凝 自然 全血 血液 第三十页，共六十四页。 2．尿样 目的：药物剂量回收，药物清除，药物代谢和生物利用度 特点：浓度高，易于收集，体内代谢研究，应水解分 离 3．唾液 唾液中药浓与血浓相关性 收集方法 离心 收集 第三十一页，共六十四页。 （二）样品的贮藏 1．血样（血浆、血清）及时分离→冷藏， -70℃加入稳定 剂NaF 2．尿样 ①尿中水、无机盐、尿素等细菌的生长， 4℃保存 ②加入防腐剂 a．1%甲苯 b．饱和氯仿 c．pH改变 3．唾液：同血样 第三十二页，共六十四页。 二、生物样品的预处理 （一）预处理的目的 ①存在形式的多样性 游离 结合 代谢物 ②浓度低，杂质多（分离浓缩） ③出现浑浊和沉淀 ④与试剂起反应 ⑤影响色谱柱寿命 第三十三页，共六十四页。 （二）处理方法选择的一般原则 1．药物理化性质 pKa 亲脂性 挥发性 溶解度 光谱特征 稳定性 2．浓度范围 灵敏的方法 3．测定的目的 定性 定量 母体 代谢 4．生物样品的种类 5．样品处理与分析方法的选择 ① 专一性 ② 灵敏性 第三十四页，共六十四页。 （三）生物样品去蛋白处理 1．加入与水能混溶的有机溶剂及中性盐 甲醇 乙腈 甲醇1:2 乙腈1:1.5 （NH4）2SO4 NaCl 2．加入酸性沉淀剂 三氯醋酸 高氯酸 苦味酸等 使蛋白质分子的阳离子形成不溶性盐而↓，pH低于等电点 第三十五页，共六十四页。 3．组织酶消化法 加入酶使蛋白质水解 优点：①平衡条件下进行，可避免反应和降解 ②可改善对蛋白结合率强的药物的回收率 ③不产生乳化 4．其他 加热 超滤 第三十六页，共六十四页。 （四）生物样品缀合物水解 1．酸水解 2．酶水解 β-葡萄糖醛酸苷酶 芳基硫酸酯酶 混合酶 pH4.5-7.0 37℃ 3．溶剂解 某些药物的硫酸酯，往往加入率取溶剂时发生分解，同时提取有机溶剂中 第三十七页，共六十四页。 （五）生物样品的萃取 1．液-液萃取 （1）优点：①与杂质分离 ②简便 ③浓集 ④提取率高 （2）提取率：在有机相与水相中的溶解度的比值分配系数，一般少量多次，对生物样品一般一次萃取， 70%重现性 第三十八页，共六十四页。 （3）影响提取率的因素 ①pH 碱性药物在碱性pH 酸性 酸性pH ②提取溶剂 相似相溶原理 沸点低，不影响检测,性质稳定，不起化学反应 ③离子强度 加入中性盐 增加离子强度，与水结合强，便于有机溶剂提取 第三十九页，共六十四页。 （4）离子对提取 对于离子性特强，水溶性极大的药物，可采用离子对提取 ①原理 ②应用 阴离子：COOH+ SO3H- 反离子 四丁基铵 阳离子：NH2+ 反离子烷基或芳基磺酸盐 （5）提取技术 一般在试管中进行 有机相与水相比1:1或2:1 第四十页，共六十四页。 （6）乳化问题 措施 ①轻缓振摇 ②含有分散度大或不溶物应过滤掉 ③避免在高pH条件下，从水中提取药物 ④避免使用易发生乳化的溶剂 ⑤萃取剂水中加入少量NaCl 第四十一页，共六十四页。 破孔方法 ①机械法 ②加入少量高级脂肪醇 改变表面张力 ③改善混合溶剂比例，增加分散相分数 第四十二页，共六十四页。 （7）药物的吸附 ①玻璃容器吸附 1%三甲一氯硅烷 10%二甲二氯硅烷 ②血浆 第四十三页，共六十四页。 2．液固萃取 固相萃取[solid phase extraction SPE] 针管式 抽空减压 加压 过滤 第四十四页，共六十四页。 （1）固相萃取步骤 ①固相选择 样品1ml 1ml规格固相 1~25ml 3ml规格固相 ②固相处理 反相C18 固定相的6~10倍体积甲醇洗柱，使溶剂化