生物蛋白质工程的崛起新人教版选修3市公开课金奖市赛课一等奖课件.pptxVIP

;活动1：假如想让某一个生物性状在另外一个生物身上表示，惯用方法有哪些？;在已研究过几千种酶中，只有极少数能够应用于工业生产，绝大多数酶都不能应用于工业生产，这些酶即使在自然状态下有活性，但在工业生产中没有活性或活性很低。这是因为工业生产中每一步反应体系中经常会有酸、碱或有机溶剂存在，反应温度较高，在这种条件下，大多数酶会很快变性失活。提升蛋白质稳定性是工业生产中一个非常主要课题。普通来说，提升蛋白质稳定性包含：延长酶半衰期，提升酶热稳定性，延长药用蛋白保留期，抵抗因为主要氨基酸氧化引发活性丧失等。;干扰素是一个抗病毒、抗肿瘤药品。将人干扰素cDNA在大肠杆菌中进行表示，产生干扰素抗病毒活性为106 U/mg，只相当于天然产品十分之一，即使在大肠杆菌中合成β-干扰素量很多，但多数是以无活性二聚体形式存在。为何会这么？怎样改变这种情况？研究发觉，β-干扰素蛋白质中有3个半胱氨酸（第17位、31位和141位），推测可能是有一个或几个半胱氨酸形成了不正确二硫键。研究人员将第17位半胱氨酸，经过基因定点突变改变成丝氨酸，结果使大肠杆菌中生产β-干扰素抗病性活性提升到108 U/mg，而且比天然β-干扰素贮存稳定性高很多。;比如：;蛋白质工程概念;;蛋白质工程流程图;讨论： 1、怎样得出决定这一段肽链脱氧核苷酸序列？ 请把对应碱基序列写出来。 ;每种氨基酸都有对应三联密码子,只要查一下遗传密码子表,就能够将上述氨基酸序列编码序列查出来。不过因为上述氨基酸序列中有几个氨基酸是由多个三联密码子编码,所以其碱基排列组合起来就比较复杂,最少能够排列出16种。同学们能够依据学过排列组合知识自己排列一下。首先应该依据三联密码子推出mRNA序列为GCU（或C或A或G）UGGAAA（或G）AUGUUU（或C），再依据碱基互补配对规律推出脱氧核苷酸序列：CGA（或G或T或C）ACCTTT（或C）TACAAA（或G）。;2、确定目标基因碱基序列后，怎样才能合 成或改造目标基因（DNA）？ ;基因会发生突变，突变能够自发，也能够诱发，这是每个稍有生物学知识人都知道常识。但在加拿大生物化学家M·史密斯（1932－）创造定点??变法之前，突变株产生必须经由自然界或用化学等方法诱使基因体突变。这类方法属于随机突变，突变株必须在生物性状上有所改变，才能确定有突变发生，但除非用分子生物方法或遗传方法找到此突变处，不然无法确定突变位置。也就是说，这种突变是盲目标。而史密斯创造定点突变法却是有目标，该法可经由设计好寡核苷酸，在任何一个基因片段上进行随意或设计好突变，也就是说，这种突变是预先设定好，所以也有些人将该法称为“反遗传法”。 　　有意思是这一给生命科学研究及应用领域带来革命性突破方法竟然是史密斯和其同事在喝咖啡时闲聊出来。现在，几乎每个生物试验室都会用定点突变法来研究基因或蛋白质功效。;蛋白质工程主要步骤通常包含： （1）从生物体中分离纯化目标蛋白； （2）测定其氨基酸序列； （3）借助核磁共振和X射线晶体衍射等伎俩，尽可能地了解蛋白质二维重组和三维晶体结构;;;（二）蛋白质改造工程举例 1．水蛭素改造 水蛭素是水蛭唾液腺分泌凝血酶特异抑制剂，它有各种变异体，由65或66个氨基酸残基组成。水蛭素在临床上可作为抗栓药品用于治疗血栓疾病。为提升水蛭素活性，在综合各变异体结构特点基础上提出改造水蛭素主要变异体HV2设计方案，将47位Asn（天冬酰胺）变成Lys（赖氨酸），使其与分子内第4或第5位Thr（苏氨酸）间形成氢键来帮助水蛭素N端肽段正确取向，从而提升抗凝血效率，试管试验活性提升4倍，在动物模型上检验抗血栓形成效果，提升20倍。;2．生长激素改造 生长激素经过对它特异受体作用促进细胞和机体生长发育，然而它不但能够结合生长激素受体，还能够结合许各种不一样类型细胞催乳激素受体，引发其它生理过程。在治疗过程中为降低副作用，需使人重组生长激素只与生长激素受体结合，尽可能降低与其它激素受体结合。经研究发觉，二者受体结合区有一部分重合，但并不完全相同，有可能经过改造加以区分。因为人生长激素和催乳激素受体结合需要锌离子参加作用，而它与生长激素受体结合则无需锌离子参加，于是考虑取代充当锌离子配基氨基酸侧链，如第18和第21位His（组氨酸）和第17位Glu（谷氨酸）。试验结果与预先构想一致，但要开发作为临床用药还有大量工作要做。;3．胰岛素改造 天然胰岛素制剂在储存中易形成二聚体和六聚体，延缓胰岛素从注射部位进入血液，从而延缓了其降血糖作用，也增加了抗原性，这是胰岛素B23-B28氨基酸残基结构所致。利用蛋白质工程技术改变这些残基，则可降低其聚合作用，使胰岛素快速起作用。该速效胰岛素已经过临床试验。 　;4．治癌酶改造 癌症基因