dna的粗提取学习.pptxVIP

1．实验原理 (1)DNA提取的原理：DNA在NaCl溶液中的溶解度，随着NaCl浓度的变化而改变。DNA在物质的量浓度为0.14mol/L的NaCl溶液中溶解度最低，利用这一原理，可以使溶解在NaCl溶液中的DNA析出。;【实验链接】鸡血细胞中的DNA主要位于鸡血细胞核中，通常先向鸡血细胞液中加入蒸馏水，并搅拌，使细胞膜和核膜涨破，将DNA释放出来，然后用较高浓度的NaCl溶液溶解，再加入蒸馏水降低NaCl溶液的浓度，使DNA析出。 (2)DNA纯化的原理：DNA不溶于酒精，而细胞中某些物质可溶于酒精，从而可提取出含杂质较少的DNA。;(2)DNA纯化的原理：DNA不溶于酒精，而细胞中某些物质可溶于酒精，从而可提取出含杂质较少的DNA。 【实验链接】实验中选用预冷的95%的酒精效果更好，除上述提取方法以外，还可以用苯酚，使蛋白质变性，抑制核酸酶的活性，通过离心分层后，DNA溶于上层水中，蛋白质变性存在于苯酚层中，使二者分开。;2．用品分析 (1)材料：鸡血 实验中用鸡血作为实验材料有三个原因：一是鸡血中血细胞含量高，DNA含量丰富；二是材料易得；三是鸡血细胞极易吸水涨破。 (2)器具 本实验过程中最好使用塑料烧杯和试管。因为玻璃表面带电荷，DNA中的磷酸基也带电荷，因而易被吸附于玻璃表面，故实验中用塑料烧杯和试管可减少DNA的损失。;(3)试剂 在DNA鉴定中所用的二苯胺是一种有毒性的试剂，在使用时注意不要让药液接触到皮肤或身体的其他部位，也不要近距离观察。;3．实验步骤;第7页/共52页;第8页/共52页;第9页/共52页;第10页/共52页;第11页/共52页;第12页/共52页;第13页/共52页;第14页/共52页;4．归纳提升 (1)加入抗凝剂的目的 制备鸡血细胞液时要在取新鲜鸡血的同时加入抗凝剂，防止血液凝固。 (2)实验中几次重复操作的目的 ①实验中有两次使用蒸馏水 a．第一次在第2步，目的是使血细胞吸水涨破； b．第二次在第4步，目的是为了稀释NaCl溶液，析出DNA。;②实验中有三次过滤 过滤时使用纱布层数与取其滤液或丝状物有关。第1、3次要其滤液，使用纱布为1～2层，第2次是要滤出丝状物，使用纱布为多层。目的都是为了获取较多的实验材料。;③实验中有三次加NaCl溶液 a．在步骤3中加入NaCl溶???，必须充分搅拌，加速染色质中的DNA与蛋白质分离，使DNA充分游离并溶解在NaCl溶液中。 b．在步骤6中加入NaCl溶液的目的也是为了DNA的再溶解，不过这时溶液中蛋白质含量已很少。 c．在步骤9中，加入NaCl溶液的浓度比前两次低得多，但还是为了溶解DNA。;④实验中有6次搅拌 除第一次搅拌外，后面5次搅拌均要朝向一个方向，并且在析出DNA、DNA再溶解和提取中，搅拌都要轻缓，玻璃棒不要直插入烧杯底部，防止DNA分子断裂。;【例题展示】　关于“DNA的粗提取”实验，部分步骤如图所示。;(1)实验材料选用鸡血细胞液，而不用鸡全血，主要原因是鸡血细胞液中含有较高含量的__________________。 (2)如图A所示实验步骤中加蒸馏水的目的是____________________；通过图B所示的步骤取得滤液，再在溶液中加入2 mol/L NaCl溶液的目的是________________；图C所示的实验步骤中加蒸馏水的目的是_______________。 (3)为鉴定实验所得丝状物的主要成分是DNA，可滴加____________溶液，________加热后，丝状物被染成____________色。;【解析】　实验材料选用鸡血细胞液，而不用鸡全血，是因为DNA存在于细胞中，而在血浆中含有较多的蛋白质等物质，不利于DNA的提取。在DNA的提取过程中，两次加入蒸馏水，其作用不同。第一次加水是为了使血细胞吸水涨破，第二次加水是为了稀释NaCl溶液，因为将蛋白质和DNA分离后，在较高浓度的NaCl溶;液中，染色质或染色体中的蛋白质容易解聚，这样DNA就游离出来，向含有DNA的浓度较高的NaCl溶液中加入大量蒸馏水，稀释NaCl溶液，DNA的溶解度会下降，当NaCl溶液浓度为0.14 mol/L时溶解度最低，从而析出DNA。;【答案】　(1)DNA　 (2)使血细胞吸水涨破　溶解DNA　使NaCl的物质的量的浓度降到0.14 mol/L，从而使DNA析出　 (3)二苯胺　沸水浴　蓝;【实验演练】　 1．(2011年高考江苏卷)在利用鸡血进行“DNA的粗提取与鉴定”的实验中，相关叙述正确的是(　　) A．用蒸馏水将NaCl溶液浓度调至0.14 mol/L，滤去析出物 B．调节NaCl溶液浓度或加入木瓜蛋白酶，都可以去除部分杂质 C．将丝状物溶解在2 mol/L NaCl溶液中，加入二苯胺试剂即呈蓝色 D．用菜