海洋胶原的制备工艺.docxVIP

海洋胶原的制备工艺 相较于陆地动物，海洋生物结缔组织结构致敏度较低，胶原较易别离 和提取，酶法制备和酸法制备是最常用的工艺。常规的胶原制备方法 包括热水提取、酸法提取、碱法提取和酶法提取、其中热水提取法常 用于鱼明胶或多肽的制备，酸法提取多用于鱼胶原或多肽的制备，酶 法提取本钱较高，常用于附加值较高的鱼胶原或高品质多肽的制备。 碱法提取在鱼胶原制备中较少应用。 热水提取法常见于海洋明胶的制备，通过40摄氏度或更高的热处理 使得胶原分子中的氢键和某些共价键局部断裂，破坏三螺旋结构，造 成螺旋-移平卷转变化，胶原分子局部变性转变为明胶。 酸法处理主要通过弱酸条件溶胀胶原纤维，造成分子内和分子间非共 价键局部断裂，使得胶原分子更易释放出来。以0.5mol/L醋酸和乳 酸作为提取介质，可获得高分子量的非变性海洋胶原，其三螺旋结构 和天然构型均可保持稳定。 酸处理法主要通过切割胶原末端端肽法增加分子的溶解性，该法制备 的海洋胶原主要三股螺旋结构仍然保持紧密链接的天然形态，而端肽 去除又可大大降低其免疫原性，是非变性海洋胶原尤其是医用产品制 备的优选工艺。 01海洋胶原常规制备工艺海洋胶原制备工艺主要包括原料预处理、提取、纯化等步骤。 1）原料预处理：主要通过清洗、切割及化学预处理等方式去除黏液、 灰分、色素、脂肪、杂蛋白等杂质，便于胶原的提取。预处理中，氢 氧化钠溶液或盐溶液常用于黏液、脂肪等的去除，对于无机组分含量 较高的骨、软骨、鱼鳞等组织，还需要采用酸溶液或乙二胺四乙酸脱 灰，这将使其具有更大的处理外表积，从而获得更高的胶原提取率。 2）胶原提取：原材料处理后，胶原的溶解性增加，通过热水法、酸 法、碱法或酶法等可有效提取。不同提取工艺各有优点，实际提取过 程中更多情况下是多种别离提取法合理共用，互相补充。 3）胶原纯化：提取胶原经盐析、离心、透析等操作去除杂质、离子 等，再经冷冻干燥、真空干燥等处理可获得高纯度胶原原料。不同来 源、不同种类的海洋胶原制备工艺有所差异，海洋胶原的变形温度较 低，为降低提取过程中的变性降解，需全程控制低温制备。 原料的预处理工艺中，绝大局部杂蛋白、色素、脂肪、无机盐、黏液 等杂质已被有效去除，但生物组织的复杂性仍会使微量的非胶原成分 混入胶原原液中，造成临床医用的潜在生物学安全风险。纯化工艺是 海洋胶原制备工艺中的关键核心技术，对于医用级海洋胶原的制备尤 其重要，常用纯化方法主要包括：沉淀法、膜别离法和色层别离法。 02海洋明胶常规制备工艺海洋明胶与哺乳动物（牛皮、猪皮或骨）明胶的制备方法及基本工艺 大致相似。但由于原料的生物特性有别，必须对于制备工艺和方法作 出相应的调整。一般分成三个阶段：原料前处理、胶液提取和精制、 胶液成型和干燥。 1）原料的前处理工艺是确保海洋明胶品质的基础。前处理的过程是 胶原转化为明胶溶出的过程。前处理的方法通常有3种，即酸处理、 碱处理、酶处理，所得明胶分别为酸法明胶（A型）、碱法明胶（B 型）和酶法明胶（E型）。A型明胶采用酸溶液处理断裂胶原分子间 及分子内的离子键、氢键等非共价交联键，进而破坏胶原的非螺旋洁 净区，促进三股螺旋结构的松散和亚基的释放。常用的一元酸为盐酸, 多元酸那么包括硫酸、亚硫酸、柠檬酸、磷酸等，也可采用混合酸溶液 处理原料。酸处理工序在明胶生产工艺中被称为脱灰。B型明胶采用 碱液降低胶原纤维的内聚力，使原料的组织疏松、体积膨胀，胶原三 股螺旋结构中的氢键局部断裂，便于后续明胶的提取。常用的碱液主 要包括石灰乳、氢氧化钠、碳酸钠等。碱处理在明胶制造工艺中被成 为浸灰。E型明胶利用蛋白酶切断胶原分子的三螺旋结构端肽，同时 可以作用于分子间的非螺旋区，切断分子内和分子间的交联，并将非 胶原水解去除，减少杂质混入，处理后的胶原纤维经过加热解开为三 条单链，可得分子量分布均匀的高质量明胶。 2）明胶胶液的提取过程就是胶原变性的过程。海洋明胶胶液提取的 基本方法是水提（熬胶），也即用高于胶原变性温度的水浴提取明胶 胶液。对于胶原热水解过程中的控制，原那么上要求通过降解作用使胶 原分子尽可能地水解成明胶，同时，提胶过程不再破坏胶原聚缩氨基 肽链的共价结构，尽可能使明胶分子量分布集中在比拟狭窄的范围 内，从而使明胶分子量的大小、结构和组成分布等都比拟稳定。明胶 溶液提取工艺是关系明胶成品率和质量的重要一环。一般情况下，胶 液的提取是分次进行的，即在不同的提取温度和条件下将明胶从原料 中溶出，可防止由于提胶时间过长而使明胶发生次级水解导致明胶质 量下降等问题。胶液提取工艺影响明胶成品的主要因素有：pH、温 度、时间、料液比。海洋明胶提取时pH的选择应该根据不同原料和 前处理方法来调整，通常提取海洋明胶的pH应该在范围内o 提胶温度应该以高于胶原变性温度为起始温度。