第四章兽药残留量的检验.pptVIP

4.3.2 猪组织中盐酸克伦特罗的检验—GS/MS法 基本原理：固体样品剪碎，用高氯酸溶液匀浆。若为液体试样，则加入高氯酸溶液，进行超声加热提取，用异丙醇+乙酸乙酯（40+60）萃取，有机相浓缩，经弱阳离子交换柱进行分离，用乙醇+浓氨水（98+2）溶液洗脱，洗脱液浓缩，经N,O-双三甲级硅烷三氟乙酰胺衍生后于气质联用仪上进行测定，以美托洛尔为内标，进行定量。 GB/T 5009.192-2003《动物性食品中克伦特罗残留量的测定》第一法——GC/MS法。 第三十一页，共四十一页。 4.3.3 猪组织中盐酸克伦特罗的检验—ELISA法 基本原理：微孔板包被有针对克伦特罗IgG的抗抗体；加入克伦特罗抗体，经过温育和洗涤后；加入酶标记物、标准或样品溶液，克伦特罗与酶标记物竞争与抗体结合；没有连接的克伦特罗酶标记物在被洗涤除去；加入酶底物和发色剂并且温育，结合的酶标记物将无色的发色剂为蓝色的产物，加入反应终止液使颜色有蓝转变为黄色。在450nm处比色测定。 GB/T 5009.192-2003《动物性食品中克伦特罗残留量的测定》第三法——GC/MS法。 第三十二页，共四十一页。 酶联免疫实验设计 4.3.3 猪组织中盐酸克伦特罗的检验——ELISA法 第三十三页，共四十一页。 4.3.3 猪组织中盐酸克伦特罗的检验——ELISA法 实验的关键操作： 试剂盒的选择和准备； 试样的处理； 加样； 洗涤； 比色。 第三十四页，共四十一页。 1）试剂盒的选择和准备 固相载体： 吸附性能，孔底透明度，板、孔性能差异； 包被物：纯度； 储存条件：2-8℃ ； 室温平衡：试验用试剂应提前1-2h从冰箱中取出，待温度与室温平衡后使用； 及时保存：试剂完毕后不需用的部分应及时放回冰箱保存。 4.3.3 猪组织中盐酸克伦特罗的检验——ELISA法 实验的关键操作 第三十五页，共四十一页。 2）试样的处理 尽可能使用新鲜样本； 进行必要的前处理。 3）加样 加样前样本必须混合均匀； 加在板孔底部，避免加在孔壁上部； 不可溅出，不可产生气泡； 每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染； 加酶结合物和底物时可用定量多道加液器。 4.3.3 猪组织中盐酸克伦特罗的检验——ELISA法 第三十六页，共四十一页。 4）温育 温育前必须震动混匀，但不可溅出； 温育的温度和时间应按规定力求准确； 温育必须避光。 5）洗涤 清洗必须彻底； 避免出现板孔干燥； 反转倾空微孔板要迅速，避免清洗液混合。 4.3.3 猪组织中盐酸克伦特罗的检验——ELISA法 第三十七页，共四十一页。 6）显色和比色 显色的温度和时间应按规定力求准确； 显色必须避光； 使用多道加液器加终止液； 显色完毕后尽快比色测定。 4.3.3 猪组织中盐酸克伦特罗的检验——ELISA法 第三十八页，共四十一页。 4.3.3 猪组织中盐酸克伦特罗的检验——ELISA法 1）样本曲线偏离正常。 2）样本吸光值高于标准曲线的最大吸光值零标准。 3）样本吸光值低于标准曲线的最小吸光值。 常见问题 第三十九页，共四十一页。 Thank You ! 第四十页，共四十一页。 内容总结 4.1 兽药与兽药残留。也包括一些化学的、生物的动物保健品或饲料添加剂。随着人们对动物源食品由需求型向质量型的转变，兽药残留已逐渐成为全世界关注的一个焦点。微生物检验（微生物抑制试验）。GC灵敏度较高，但易出现假阳性、阳性结果需进一步确证。在另外的微孔中加入100μL已完成前处理的样品溶液。于每一微孔中加入100μL反应终止液，用酶标仪于波长450nm下判读。每次吸取不同的液体时一定要换移液枪的吸头。4.3.3 猪组织中盐酸克伦特罗的检验——ELISA法。室温平衡：试验用试剂应提前1-2h从冰箱中取出，待温度与室温平衡后使用。及时保存：试剂完毕后不需用的部分应及时放回冰箱保存。不可溅出，不可产生气泡 第四十一页，共四十一页。 * 4.1 兽药与兽药残留 （研究背景、兽药残留产生的原因、类型、危害） 4.2 水产品中氯霉素的检验 （对虾中氯霉素含量的竞争性ELISA法检测） 4.3 猪组织中盐酸克伦特罗的检验 （猪组织中盐酸克伦特罗的GS/MS法检测、猪组织中盐酸克伦特罗的ELISA法检测 ） 第四章 兽药残留量的检验 内容要点： 第一页，共四十一页。 兽药：预防和治疗畜禽疾病的药物；促进生长、提高生产性能、改善动物性食品的品质；也包括一些化学的、生物的动物保健品或饲料添加剂。 现代化的动物集中饲养，经常需要使用抗生素或其他药物来控制可能爆发的疾病，同时有效使用兽药可以在很大程度上提高动物对饲料的利用率。 4.1 兽药与兽药残留 1、研究背景 第二页，共四十一页。