实验八DNA重组子的构建与鉴定.ppt

精选ppt 实验八 DNA重组子的构建与鉴定 ◆获得目的基因片段，选择好适当的载体， 并确定重组方案后，接下来要进行的就是ＤＮＡ片段之间的体外连接了（即DNA重组），从而获得DNA重组体又叫DNA重组子。 ◆DNA重组子需转移入相应的受体细胞中用于对目的基因的扩增及目的基因的蛋白表达。 原理 DNA重组技术的操作过程 3 A- -A 3 PCR product T-A cloning 3 A- -A 3 PCR product MCS PCR product T-A cloning 重组体导入受体细胞可能的情况 由于重组体DNA分子导入受体细胞的比例通常较低，只有极少数受体细胞接受到重组体DNA分子，能实现目的基因的转移；绝大部分仍是原来的受体细胞，或者是不含目的基因的转化子。所以必须从大量的培养细胞中初步筛选出含有目的基因重组体的受体细胞并作进一步的鉴定。 重组体导入受体细胞的效率较低 重组体导入受体细胞后的筛选培养 大部分是含空载体的转化子（非重组子） 少部分是含目的基因的转化子（重组子） 少数是不含载体的受体细胞（非转化子） 常用鉴定方法 小规模制备质粒DNA进行限制酶切分析 ?互补 杂交筛选 酶切和电泳方法 琼脂糖凝胶电泳分离鉴定大小不等的酶解片段： 32P标记的DNA分子探针 杂交 放射自显影法 DNA杂交直接鉴定 Ampr抗性筛选和α互补(蓝白