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药品控制菌检查法中大肠埃希菌贮藏方法的研究 摘要：大肠埃希菌在4°中贮藏，其作为实验菌的活性。连续31天进行大肠埃希菌计数和特征实验，进而验证其数量及性状的稳定性。结果表明，在连续31天的实验中，大肠埃希菌的菌落数范围在1.5×109cfu/ml～8.7×109cfu/ml，且菌落大小、形态特征、指示反应等情况均体现出该菌种应有特性。实验证明，在4°冰柜贮藏条件下，大肠埃希菌能够作为对照菌进行控制菌检查法实验。 关键词：大肠埃希菌;贮藏;研究 中图分类号：r927文献标志码：a文章编号：2095-2945（2019）11-0175-02 abstract：escherichiacoli（e.coli）wasstoredat4°asanexperimentalbacterium.thecountingandcharacterizationexperimentsofe.coliwerecarriedoutfor31consecutivedaystoverifythestabilityofitsquantityandcharacter.theresultsshowedthatthecolonynumberofescherichiacolirangedfrom1.5×109cfu/mlto8.7×109cfu/mlfor31consecutivedays，andthecolonysize，morphologicalcharacteristicsandindicativereactionsallreflectedthepropercharacteristicsofthestrain.theresultsshowedthate.colicouldbeusedascontrolbacteriainthecontrolbacteriatestunder4°storagecondition. keywords：escherichiacoli（e.coli）;storage;study 依据《中华人民共和国药典》2015版，非无菌产品微生物限度检查中的控制菌检查法，需进行阳性对照试验，每次试验均需要加入不大于100cfu的对照菌[1]。依据药典指导原则，菌种可采用低温冷冻干燥、液氮贮存、超低温冷冻（低于-30℃）等保存方法。使用以上方法保存菌种，则需在每次实验前都要进行菌种活化和计数实验，进而配制不大于100cfu的加菌量。本公司药品均进行微生物限度检查，其中含有大肠埃希菌项目。为提高检验效率，寻找适宜的菌种贮藏方法，同时结合本实验室实际情况，将大肠埃希菌经复苏后接种至胰酪大豆胨液体培养基中，24h菌种活化后，4°c冰柜里贮藏。随后每日进行菌种数量及性状验证，为进行大肠埃希菌的贮藏提供有益的科学探讨。 1材料与方法 1.1仪器与材料 bpx-272型电热恒温培养箱由上海博迅医疗设备厂生产;ysq-ls-75sii型立式压力蒸汽灭菌器由上海博迅医疗设备厂生产;1300系列a2型生物安全柜由赛默飞生产;大肠埃希菌[cmcc（b）44102]经销中国食品药品测验研究院;实验所用培养基经销北京奥博星生物技术有限责任公司。 1.2实验方法 1.2.1菌液制取：衰退后的大肠埃希菌菌种（不少于5代）移往胰酪大豆胨液体培养基复置培养箱中30～35°c培育24h，培育后储藏至4°c冰柜。 1.2.2菌种计数：取1ml菌液用ph7.0蛋白胨缓冲液逐级稀释至10-10，取各级稀释菌悬液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15～20ml温度不超过45°c熔化的胰酪大豆胨琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养。30～35°c培养24h，然后计数。 1.2.3性状检验：10-8吸收级菌液大肠埃希菌注射于麦康凯液体培养基（42～44°c培育24h）和麦康凯琼脂培养基（30～35°c培育24h）中，观测培养基上大肠埃希菌生长情况。 2实验结果 2.1菌种计数实验结果 由表1可以看出，大肠埃希菌在4°c冰柜里贮藏，连续31天的菌落数范围在1.5×109cfu/ml～8.7×109cfu/ml之间。 2.2性状检验实验结果 由表2可以看出，大肠埃希菌在4°c冰柜里贮藏，连续31天取菌液量均不大于100cfu，加入麦康凯液体培养基和麦康凯琼脂培养基中，培养基体现的菌落大小、形态特征、指示反应等情况均体现出大肠埃希菌应有特性（+表示）。 综上，将大肠埃希菌在4°c冰柜里储藏，已连续31天展开计数和性状实验。结果表明，挑10-8吸收级菌液，每ml菌液量均不大于100cfu，这可以用作大肠埃希菌检测阳性对照试验的加菌量，无须每次展开检验。同时