化学分离工程课件-分离纯化.pptVIP

对生物技术产品分离纯化的思考 蛋白质的分离纯化是科学加艺术生命科学研究的基本手段生命物质组成 后基因组 蛋白质组 条条大路通北京， 寻找一条最近的路！ 分离纯化的目的 以最简单的技术 最少的步骤， 最高的收率， 最低的成本， 生产合格产品。 后处理的规模 规模是相对的、模糊概念。按其规模、操作难易、成本、市场的大小而改变。 蛋白酶需500T/Y (纯蛋白)，规模可谓大；内切酶由几公斤细胞所得的产品可满足世界的需求，也不可谓小。两者质量要求，技术难度，方法、技术和步骤的复杂程度大不相同。 分离纯化工艺设计考虑因素 产品活性、纯度和杂质 评价单元操作与工艺的可靠性与水平，指导单元操作、工艺和设备条件选择和改进。 规模 决定技术、工艺 和设备选择。 分离纯化工艺设计考虑因素 产物表达形式和表达水平 不同宿主细胞具有不同的蛋白质合成、运转和后加工机制，表达的产物形式不同，所处位置不同。因不同表达形式具有不同表达水平，有不同的杂质。分离纯化策略也不同。 (胞内外、可溶性表达、包含体、融合蛋白等) 分离纯化工艺设计考虑因素 产物及杂质的分子特性 分子特性包括物理化学参数及生物学特性，决定分离原理、单元操作和工艺。 （蛋白酶、抑制剂、同系物、类似物） 分离纯化工艺设计考虑因素 产品用途及质量要求 产品用途和使用方式、剂量决定了需要的产品纯度；产品的纯度、杂质的性质和制剂形式与稳定性有关，决定了产品的商品寿命。 基因工程药物的‘杂质和污染’ 热源（宿主、试剂、水） 毒素 要去除，要检测 病毒 转化DNA 错误翻译蛋白质 糖基化差异蛋白质 产物的氧化还原和降解物 聚合体和构象异构体 生物活性，质量，杂质检测 简便快速，准确可靠，重复性好 生物活性检测：不同产品不同方法 质量与杂质检测： SDS，PAGE HPLC，CE，等电聚焦 肽谱分析，氨基酸序列分析，氨基酸组成分析 分离纯化过程的检测 方法 目标 说 明 电泳 测定污染蛋白 coomassie blue 染色，腿色。 银染色，免疫+银染色 液相色谱 测定污染蛋白 适当的固定相，峰数及峰面 积 Elisa 测定宿主蛋白 酶联免疫吸附测定，竞争结 合实验 免疫测定 测定亲和配基污染 专一的抗原-抗体作用 氨基酸序列 测定产物末端序列 有控蛋白酶水解，液相色谱 分析氨基酸和多肽 分离纯化过程的检测 典型图谱 依据多肽片段分析 蛋白酶降解，反相色谱， 和鉴定的蛋白图谱 杂交 测定DNA序列 互补核酸序列结合发现的 DNA或RNA的特殊序列上 NMRh和MS 生物物理性质研究 覆盖分析仪，确定生物学特 殊性 蛋白结构分析 免热源检测 测定热源， 标准检测，免疫无病原体小 鼠检测抗病 抗体