影响外源基因表达效率的因素.pptVIP

* 影响外源基因表达效率的因素 第1页，共9页。 17bp 第2页，共9页。 （4） 外源基因表达对启动子有一定的选择性。 例如：表达尿激酶原（Pro-UK）时, 利用Ptac最好，Ptrp次之，PL最差。 （5）启动子的数目：增加启动子数目，也可以提高表达效率。 例如：利用两个串联的Ptac启动子使人的心扩张素（Cardiodilatin）蛋白得到了高效表达 。 第3页，共9页。 2、表达载体的选择 （1）表达载体本身不宜过长，以2.5～5.6kb为佳。 太大的载体既不利于自身复制, 也会在表达较小的外源基因时难以进行重组体的筛选 。 （2）对于某些小分子量的蛋白质，有时要选用形成融合蛋白的表达载体，以防蛋白降解。 （3）采用高拷贝的质粒载体上。 第4页，共9页。 3、外源基因（cDNA）中密码子的选用 （1）原核生物的偏爱密码子和稀有密码子 现已发现AGA.AGG（编码精氨酸）等8种密码子是E.coli的稀有密码子。 （2）利用E.coli表达外源基因时, 对cDNA要尽可能减少稀有密码子的含量。 第5页，共9页。 4、mRNA的一级结构与基因表达 （1）SD序列 SD序列与16SrRNA的互补程度 SD序列长度：正比 SD序列与AUG之间的距离：9个核苷酸的间距为最佳 第6页，共9页。 UAU或CUU UUC、UCA或AGG 第7页，共9页。 *