细菌简单染色法.docx

简单染色 简单染色 微生物染色原理 简单染色法是利用单一染料对细菌进行染色的一种方法。此法操作简便，适用于菌体一般形状和细菌排列的观察。 常用碱性染料进行简单染色，这是因为：在中性、碱性或弱酸性溶液中，细菌细胞通常带负电荷，而碱性染料在电离时，其分子的染色部分带正电荷(酸性染料电离时，其分子的 染色部分带正电荷)，因此碱性染料的染色部分很容易与细菌结合使细菌着。染色后的细菌细胞与背景形成鲜明的对比，在显微镜下更易于识别。 常用作简单染色的染料有：美蓝、结晶紫、碱性复红等。 使用草酸铵结晶紫染色液，染色迅速，着色深，菌体呈紫色。 步骤 1、涂片 取一块干净的载玻片，平放，在载玻片中央滴一小滴生理盐水； 用接种环无菌操作从琼脂斜面上挑取适量菌苔； 将挑取的菌苔沾入载玻片中央生理盐水中混匀并涂成薄膜。 注意：载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌不宜过多；涂片要涂抹均匀，不宜过厚。 2、干燥 将涂好菌膜的载玻片平放在室温下自然干燥。也可用电吹风低温吹干。 3、固定 手持(木夹夹住)已干燥的涂有菌膜的载玻片，涂面朝上，在酒精灯火焰上通过2~3 次。原理：加热使细菌细胞的蛋白质凝固，从而固定细菌细胞形态，并使之牢固附着在载玻 片上。 注意：热固定温度不宜过高，否则会改变甚至破坏细胞形态。 4、染色 将热固定的细菌涂片平放于在载玻片架上，滴加染液于涂片上（染液刚好覆盖涂片薄膜为宜）。 染色时间：吕氏碱性美蓝染色 1~2min；石炭酸复红染色约 1min；草酸铵结晶紫染色约 1min。5、水洗 将细菌涂片上染液倒入废液缸中；手持细菌染色涂片，置于废液缸上方，用洗瓶中自来水冲洗涂片，直至流下的水无色为止。 注意：水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的一端流下。水流不宜过急， 过大，以免涂片薄膜脱落。 6、干燥 自然干燥：平放于室温，自然干燥； 吹干：用电吹风冷风或低温热风吹干； 1、吕氏碱性美蓝染液溶 1、吕氏碱性美蓝染液 溶液A 美蓝 0.6 克；95%乙醇 30 毫升 溶液B 氢氧化钾 0.01 克；蒸馏水 100 毫升 分别配制溶液A 和 B 配好后混合即可。 2 2、石碳酸复红液：称取碱性复红 10g，研细，加 95％乙醇 100ml，放置过夜，滤纸过滤。取该液 10ml，加 5％石碳酸水溶液 90ml 混合，即为石碳酸复红液。再取此液 10ml 加水 90ml 即为稀石碳酸复红液。 3、草酸铵结晶紫染液 A 液：结晶紫(crystal violet) 1g，95%酒精 20ml B 液：草酸铵(ammonium oxalate) 0.8g，蒸馏水 80ml 混合 A、B 二液，静置 48 小时后使用。