医院手工免疫组化操作流程.docx

手工免疫组化操作流程 1.切片烤片：2-3um切片60-70度烤片1h(至少烤片30min) 2.常规脱蜡水化：切片浸于二甲苯中5*3分钟，取出切片置于无水乙醇中2min,梯度酒精脱水各2min,用PBS冲洗3*3分钟。 3.抗原修复： （1）99度热水修复30min(修复液Target Retrieval Solution High PH*50) （2）高压锅修复3min(修复液EDTA PH 8/9) 4.修复完毕后PBS冲洗3*3分钟 5. 过氧化物酶阻断剂（常用3%过氧化氢）10min,蒸馏水洗后油笔画圈，PBS冲洗3*3分钟 6.除去PBS，滴加一抗，37度孵育2.5h后PBS冲洗3*3min 7.除去PBS，滴加二抗（dako的EnVision FLEX）37度孵育30min后PBS冲洗3*3min 8.切片上滴加预备好的DAB显色液，室温孵育5-10min,显色完成后水洗终止显色 9.苏木素复染