核酸质谱检测原理、配套通用试剂、预处理程序.docxVIP

（资料性）核酸质谱检测原理 A A T 核酸扩增 单碱基消化 SAP酶去除剩余dNTPs A T 单碱基延伸 Na+ H+ Na+ 离子交换 样本核酸纯化 10 nt tag 核酸质谱检测 核酸检测原理示意图 （资料性）核酸质谱检测配套通用试剂 核酸质谱检测配套通用试剂宜采用成熟的预处理试剂或预混液体系，包括但不限于多重扩增预混液、单碱基消化预混液和单碱基延伸预混液，各预处理试剂或预混液体系配置在不同应用条件下可进行适应性调整，推荐配方如下： 多重扩增预混液配方表 试剂名称 浓度 体积μL PCR缓冲液 10× 0.5 MgCl2 25mM 0.4 dNTPs 25mM 0.1 DNA聚合酶 5U/μL 0.2 PCR扩增引物 500μM 1 纯化水 / 0.8 DNA ≥10ng/μL 2 单碱基消化预混液配方表 试剂名称 浓度 体积μL 消化缓冲液 10× 0.17 SAP 1.7U/μL 0.3 纯化水 / 1.53 单碱基延伸预混液配方表 试剂名称 浓度 体积μL 延伸缓冲液 10× 0.2 ddNTPs 10× 0.2 延伸酶 32U/μL 0.04 单碱基延伸引物 5～15μM 0.94 纯化水 / 0.62 （资料性）核酸质谱检测预处理程序 核酸质谱检测预处理程序包括但不限于多重核酸扩增程序、单碱基消化程序和单碱基延伸程序，在不同应用条件下可进行适当调整，推荐程序如下： 多重核酸扩增程序 步骤 温度 时间 循环数 1 95℃ 2min 1 2 95℃ 30sec 45 60℃ 30sec 72℃ 1min 3 72℃ 5min 1 4℃保温* 单碱基消化程序 步骤 温度 时间 循环数 1 37℃ 40 min 1 2 85℃ 5 min 1 4℃保温* 单碱基延伸程序 步骤 温度 时间 循环数 1 95℃ 30 sec 1 2 95℃ 5 sec 1 40 52℃ 5 sec 5 80℃ 5 sec 3 72℃ 3 min 1 4℃保温* *建议