环状RNA的定量PCR检测实验方法.docxVIP

环状 RNA 的定量 PCR 检测实验方法 1.介绍 环状 RNA（ circRNA）已经在许多物种中被鉴定出来，包括人类，老鼠，线 虫和腔棘鱼。人们认为，部分环状 RNA通过调节 microRNA（ miRNA）而起到调控 基因表达的作用。环状 RNA调节基因表达的机制之一是通过作为 miRNA的“海 绵”，隔离 miRNA并降低其可用性以降低靶 mRNA的稳定性或翻译。根据其他研 究的分子功能， circRNA 也可以作为 RNA结合蛋白（ RBP）的海绵，提供组装 RBP 的平台，并且与 mRNAs相联结以在转录后调节其表达。 我们使用 TRIzol 从这些细胞中分离总 RNA，通过 RNaseR 处理提高 circRNA 的浓度，逆转录（RT）后通过实时定量 （q）PCR分析鉴定 circRNA。使用从 RT-qPCR 获得的数据来计算细胞之间的 circRNA 表达的变化情况。 2. 材料 注意：所有的试剂，材料和仪器应小心处理，使它们保持无核酸酶污染。 RNA 分离 增殖细胞（ P）和通过癌基因诱导衰老（ OIS）的衰老细胞（ S）。 Dulbecco 的磷酸盐缓冲盐水（ DPBS） 涡流混合器。 细胞刮刀。 TRIzol? 试剂（储存在 4°C）。 无核酸酶的水。 不含 RNase的 1.5mL 微量离心管。 NanoDrop 分光光度计。 通过 RNase R提高