实验一蛋白质含量测定考马斯亮蓝染色法.pptVIP

第一页，共三十一页，2022年，8月28日 Please be quiet, 上课了！！ 第二页，共三十一页，2022年，8月28日 1、学习利用考马斯亮蓝G-250染色法测定蛋白质含量的原理及方法； 2、掌握分光光度计的使用方法； 3、掌握标准曲线的绘制。 一、实验目的： 第三页，共三十一页，2022年，8月28日 考马斯亮蓝G-250在酸性溶液中游离状态下为棕红色。 当它与蛋白质通过范德华键结合后变为蓝色. 蛋白质染料复合物对595nm可见光有最大光吸收. 在一定范围内（ 10 -1000ug/ml）其OD595nm值与蛋白质含量成正比，故可用分光光度法进行蛋白质的定量测定。 二、实验原理： 第四页，共三十一页，2022年，8月28日 考马斯亮蓝G-250染色法原理 465 nm 595 nm 酸性环境下呈棕红色 与蛋白质结合变蓝色 加入蛋白质 第五页，共三十一页，2022年，8月28日 双缩脲反应： Folin-酚试剂法（Lowry法）： 紫外吸收法： 微量凯式定氮法： 其他蛋白质含量的测定方法 第六页，共三十一页，2022年，8月28日 （1）双缩脲法： 原理是蛋白质含有两个以上的肽键（-CO-NH-）因此，有双缩脲反应，在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成紫色络合物，其颜色深浅与蛋白质含量成正比，故可以