生物化学实验项目.docVIP

PAGE PAGE 24 实验项目一 蛋白质等电点测定 【实验目的】 1．验证蛋白质的两性电离和等电点。 2．掌握测定酪蛋白等电点的原理和方法 【实验用品】 器材：试管、试管架、刻度吸管（0.5 ml、1ml、5 ml）、吸耳球、记号笔。 试剂： 1．0.01mol/L乙酸 2．0.1mol/L乙酸 3．1mol/L乙酸 4．5g/L酪蛋白乙酸钠溶液 称取纯酪蛋白0.25g，加入蒸馏水20 ml及1.0mol/LNaOH5ml，混合，至酪蛋白完全容易。然后加入1.0mol/L乙酸5 ml，移入50 ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度。 【实验原理】 蛋白质分子中既含有酸性基团（如—COOH），又含有碱性基团（如—NH2、胍基等）是两性化合物。这些基团在不同的PH值溶液中可发生酸式电离或碱式电离。蛋白质在水溶液中的带电情况，不仅取决于本身的结构，还取决于溶液的PH值。调节溶液的PH值，可使蛋白质带有不同的电荷。 【实验方法】 取干净试管5支，编号后，按下表操作 试剂 1 2 3 4 5 蒸馏水 1.6 — 3.0 1.5 3.38 0.01mol/乙酸ml — — — 2.5 0.62 0.1mol/L乙酸ml — 4.0 1.0 — — 1.0mol/L乙酸 ml 2.4 — — — — 5g/L酪蛋白 乙酸钠溶液 ml 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 溶液PH值 3.2 4.1 4.7 5.3 5.3 沉淀结果 立即混合各管，静置10分钟，观察各管沉淀情况，结果用“-，+，++，+++”表示，并记录于表中。 【思考分析】 酪蛋白质的等电点是多少 实验报告 实验名称 实验时间 实验目的 实验用品 操作方法 实验结果 结果分析及思考题 教师评语 【操作要求及考核标准】 考核 内容 分值 评价标准 素质 要求 10 工作衣帽穿戴整齐--5 回答问题语言清晰流畅--5 操作 前 准备 10 复习与实验有关的理论内容--5 能简述出本次实验的名称、操作要点、预期结果--5 操作 过程 及 实验 报告 70 称取纯酪蛋白0.25g--5 加入蒸馏水20 ml及1.0mol/LNaOH5ml，混合，至酪蛋白完全溶解。--10 加入1.0mol/L乙酸5 ml，移入50 ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度。--10 取干净试管5支，编号加入各种试剂--10 立即混合各管，静置10分钟，观察各管沉淀情况，记录于表中--10 随时分析实验中出现的问题，并提出解决方案--5正确书写实验报告--5 记录实验数据、分析实验结果--10 正确回答实验指导中的问题--5 操作 后 要求 10 清理实验物品、妥善处理废弃物—5 消毒洗手—5 合计 100 学生互评结果得分（乘以0.3系数） 教师评价结果得分（乘以0.7系数） 最后综合得分 实验项目二 温度、pH对酶促反应的影响 【实验目的】 通过观察不同的温度、pH条件下，唾液淀粉酶对淀粉的作用，了解温度、pH对酶促反应的影响。 【实验原理】 唾液淀粉酶可催化淀粉水解，生成分子大小不同的糊精、麦芽糖和少量葡萄糖。由于在不同的温度、PH条件下，淀粉酶的活性不同，使淀粉水解的程度也不一样，因而遇碘后会产生不同的颜色，根据颜色的不同，可判断淀粉水解的程度，从而了解温度、PH对酶活性的影响。 淀粉 淀粉酶 糊精 淀粉酶 麦芽+葡萄糖 加碘液 （呈蓝色） （呈紫色） （呈黄色，为碘本身颜色） 【实验用品】 试剂：1、1%淀粉溶