动物细胞工程第2课时课件 【备课精研+高效课堂】 高二下学期生物人教版（2019）选择性必修3.pptxVIP

第2章 细胞工程第2节 动物细胞工程 第2课时 新课引入 龙是我国古代传说中的神奇动物，它有蛇身、鱼鳞、鹿角、牛耳、鹰爪等。 有没有一种动物细胞工程技术可以让不同种动物的体细胞进行杂交，从而培育出集不同细胞的优势于一身的动物细胞，乃至于新的动物个体呢？一、动物细胞融合技术 （一）概念 动物细胞融合技术就是使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。如学过的“人鼠细胞融合”。一、动物细胞融合技术 （二）原理细胞膜的流动性 （三）诱导方法物理：电融合法化学：PEG融合法生物：灭活病毒诱导法 一、动物细胞融合技术灭活病毒诱导法 灭活病毒是指使用物理或化学的方法使病毒失去感染能力，但并不破坏他们的抗原结构。 原理：当使用灭活病毒诱导细胞融合时，病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。资料一、动物细胞融合技术 （四）结果 通过动物细胞融合形成的杂交细胞具有原来两个或多个细胞的遗传信息。动物杂交细胞可以发育成个体吗？不能 动物细胞只有细胞核全能性，无细胞全能性。一、动物细胞融合技术 （五）意义 突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能。思考 动物细胞融合与植物体细胞杂交技术相比有哪些不同？一、动物细胞融合技术比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理细胞融合方法诱导方法用途 细胞膜的流动性植物细胞全能性细胞膜的流动性去除细胞壁后诱导原生质体融合使细胞分散后诱导细胞融合物理（离心、电刺激）化学（聚乙二醇）灭活的病毒物理（离心、电刺激）化学（聚乙二醇）获得杂种植株制备单克隆抗体一、动物细胞融合技术 （六）应用 动物细胞融合技术成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段，特别是利用动物细胞融合技术发展起来的杂交瘤技术，为制造单克隆抗体开辟了新途径。二、单克隆抗体及其应用 知识回顾抗体是如何产生的？浆细胞抗体 抗体是在体液免疫中产生的，哺乳动物感染病原体后，体内会形成相应的B淋巴细胞。受到抗原的直接刺激和活化辅助T细胞的双重刺激，B细胞可以增殖分化为浆细胞和记忆B细胞。浆细胞产生和分泌大量抗体。二、单克隆抗体及其应用 知识回顾抗体怎样发挥作用？ 抗体是能够与抗原发生特异性结合的免疫球蛋白。抗体识别并特异性结合病原体，从而抑制病原体的增殖。二、单克隆抗体及其应用 （一）早期获得抗体的做法 向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离抗体。 问题：该方法制备的抗体产量低、纯度低，而且特异性差，为什么？ 每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，动物体内产生的特异 性抗体的种类可多达百万种以上。即使使用同一种抗原多次刺激，也会出现抗体不纯的现象。二、单克隆抗体及其应用（二）单克隆抗体 如何大量获得对抗某种特定病原体的同种抗体(单克隆抗体) ？分裂（克隆）合成分泌大量同种抗体大量同种细胞(单克隆)单个细胞浆细胞可完成单克隆抗体体外条件，浆细胞不能增殖。那无限增殖的细胞是？怎么获得单克隆抗体？B淋巴细胞骨髓瘤细胞融合二、单克隆抗体及其应用 如何大量获得单克隆抗体 ？ 技术路线一个B淋巴细胞(只分泌一种特异性抗体)动物细胞培养技术杂交瘤细胞动物细胞融合技术单克隆抗体骨髓瘤细胞(无限增殖)既能产生特异性抗体又能大量增殖的细胞二、单克隆抗体及其应用 如何大量获得对抗某种特定病原体的同种抗体(单克隆抗体) ？ 二、单克隆抗体及其应用如何诱导融合？思考1特定抗原注射B淋巴细胞动物PEG、电击灭活病毒诱导融合骨髓瘤细胞 为保证诱导融合在单个细胞之间进行，可先用胰蛋白酶处理细胞。二、单克隆抗体及其应用进行诱导融合后，培养基中会有几种细胞？2思考5种骨髓瘤+骨髓瘤B细胞+B细胞骨髓瘤+B细胞B细胞(未融合)骨髓瘤(未融合)思考 3如何筛选出所需的杂交瘤细胞？选择培养基二、单克隆抗体及其应用 1．DNA的合成有D途径和S途径两种途径，其中D途径是在 叶酸的辅助下，由氨基酸等小分子合成核苷酸；S途径是利用酶，催化次黄嘌呤（H）和胸腺嘧啶脱氧核苷（T）生成相应的核苷酸。 2．已知氨基蝶呤（A）是叶酸的拮抗物；实验所用的骨髓瘤细胞缺乏S途径中的酶。拓展利用HAT选择培养基可以筛选出所需细胞吗？骨髓瘤+骨髓瘤B细胞+B细胞骨髓瘤+B细胞骨髓瘤(未融合)B细胞(未融合)存活二、单克隆抗体及其应用如何得到能够产生所需的单一抗体的杂交瘤细胞？思考 4 使用96孔板培养杂交瘤细胞，尽可能每一个孔只接种一个杂交瘤细胞，即将单个杂交瘤细胞单独培养，通过克隆化培养+抗体检测，即可获得大量产生所需抗体的杂交瘤细胞。二、单克隆抗体及其应用如何大量培养杂交瘤细胞，获得所需抗体？思考 5 将抗体检测阳性的杂交瘤细胞在体外条件下大规模培养或注射到