《仪器分析实验》高效液相色谱法.pptx

厦门大学精品课程仪器分析(含实验)《仪器分析实验》高效液相色谱法High Performance Liquid ChromatographyFor Short：HPLC第一页，共十四页。实验目的了解HPLC仪器基本结构,掌握实验仪器的一般使用方法； 加深对色谱分离原理的理解，掌握主要实验条件的选择； 掌握液相色谱定性定量分析技术。实验内容反相高效液相色谱法分离测定烷基苯系物 第二页，共十四页。实验讲解要点 一、色谱分离原理 二、色谱分析技术 三、 HPLC仪器和使用方法 四、 HPLC和GC的比较 五、 RP-HPLC测定烷基苯化合物原理 建议在实验过程中，对比前面的气相色谱实验技术，进一步巩固和提高所学知识和实验技能。 第三页，共十四页。一、色谱分离原理色谱法是一类高效分离方法。 色谱分离原理是什么？ HPLC和GC仪器的分离部件是什么？它们有什么不同？ HPLC和GC的主要差别？第四页，共十四页。二、色谱分析技术 色谱分析是一类重要的仪器分析方法，其特点是分离能力强、定量准确，适合于复杂样品或多组分样品分析。 常见的色谱定性方法？ 色谱定量分析的依据？ 气相色谱实验采用那种定量分析方法？有何特点？ HPLC和GC的应用特点 第五页，共十四页。三、 HPLC仪器和实验技术 HPLC仪器的基本组分？ 主要部件的工作原理？ HPLC和GC仪器的比较 HPLC和GC实验技术的比较 有人认为色谱分析实验很简单，就是打一针样品而已，你是怎么认为的？你是否给病人打过针？为什么没有？第六页，共十四页。四、高效液相色谱仪的基本组成分几个系统？和GC有何不同？高压泵工作原理？GC是如何进样的？记录系统和GC一样吗？第七页，共十四页。高压泵工作原理（单向阀） 高压液体有危险吗？ 高压泵如何改变流速？第八页，共十四页。高压泵工作原理（单向阀）六通阀工作原理（流路切换） HPLC进样针与GC有何不同？ 为什么HPLC与GC进样要求不同？第九页，共十四页。五、 RP-HPLC测定烷基苯化合物原理 什么是正相色谱？什么是反相色谱？ 什么是键合固定相？ 预测一下苯和甲苯在C18反相柱上的保留顺序？ 什么是反相色谱疏水机理？ 本实验的主要色谱分析条件有那些？ 流动相组成对保留时间有何影响？举例说明？ 改变检测波长对色谱图有何影响？第十页，共十四页。HPLC的溶剂选择 本实验采用什么流动相？ 什么是HPLC级甲醇、乙腈溶剂？ 如何获得超纯水？ 本实验所用的流动相如何配制？ 流动相为什么要除气？如何除气？第十一页，共十四页。六、实验部分 一、溶液配制1 配制标准系列溶液 三组分混标液：每mL溶液分别含1.00mg苯、甲苯和乙苯。 分别准确移取0.40、0.80、1.20、1.60和2.00mL三组分混标液于10mL容量瓶中，用流动相溶剂定容。2 流动相的配制、过滤和除气。 五组分混标液：含适量苯、甲苯、乙苯、丙苯和丁苯。 标准苯测试液。 未知样品1号、2号和3号。 第十二页，共十四页。二、色谱实验条件 A组：Waters HPLC仪色谱柱：Nova Pak C18 (3.9×150mm, 4μm)流动相：CH3OH-H2O (70/30, v/v)流速：0.8 mL/min检测波长：254nm进样体积：20μLB组：TSP HPLC仪色谱柱：Hypersil BDS C18 (4.0×200mm, 5μm)流动相：CH3OH-H2O (80/20, v/v)流速：0.8 mL/min检测波长：254nm进样体积：20μL 第十三页，共十四页。三、实验内容与主要步骤1 更换流动相。2 开动仪器，让色谱柱平衡。3 设置色谱工作站参数。4 进样、采集色谱图。1）五组分混标液2）标准溶液系列3）未知样品5 色谱数据分析，打印色谱图及分析报告。6 更换甲醇流动相，清洗色谱柱。7 关闭仪器。第十四页，共十四页。