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核酸的生物合成 ; DNA是生物遗传的主要物质基础,生物机体的遗传信息以密码的形式编码在DNA分子上,表现为特定的核苷酸排列顺序,并通过DNA的复制由亲代传递给子代。在后代的生长发育过程中,遗传信息自DNA转录给RNA,然后翻译成特异的蛋白质,以执行各种生命功能,使后代表现出与亲代相似的遗传性状。;;中心法则的遗传流向有5条途径
1、DNA→DNA:DNA复制
(以DNA为模板合成DNA)
2、RNA →RNA:RNA复制
(以RNA为模板合成RNA)
3、DNA → RNA:DNA转录
(以DNA为模板合成RNA)
4、RNA → DNA:反(逆)转录
(以RNA为模板合成DNA)
5、RNA → Protein:翻译;
;第一节 DNA的生物合成;;;DNA的半保留复制的生物学意义:;二、与DNA复制有关的酶和蛋白质
原料:四种脱氧核苷三磷酸(dATP、dGTP、
dCTP、dTTP)
模板:以DNA的两条链为模板链,合成子代DNA。
引物:一小段RNA(或DNA)为引物,在大肠杆菌
中,DNA的合成需要一段RNA链作为引物。;催化因子
1.引物合成酶(引发酶):此酶以DNA为模板合成一段RNA,这段RNA作为合成DNA的引物(Primer)。实质是以DNA为模板的RNA聚合酶。
2.DNA聚合酶:以DNA为模板的DNA合成酶,其催化反应的特点 (1)以四种脱氧核苷酸三磷酸为底物;(2)反应需要有模板的指导;(3)反应需要有3?-OH存在;
(4)DNA链的合成方向为5 ? ? 3 ?
;(5) DNA聚合酶的反应可以利用DNA双链作为模板和引物,亦可以单链DNA作为模板和引物;原核生物中的DNA聚合酶;
⑶ DNA聚合酶Ⅲ:是原核生物DNA复制的主要聚合酶,该酶由10种亚基组成,其中?、?、?形成全酶的核心酶。具有5’?3’DNA聚合酶活性( ?亚基,速率高); 具有3’ ? 5’外切酶(?亚基)的校对功能,提高DNA复制的保真性;还具有5’ ? 3’外切酶活性(单链有效,其意义未知)。
(4) DNA聚合酶IV和V:1999年发现,当DNA严重损伤时,诱导产生。
; DNA聚合酶Ⅰ DNA聚合酶Ⅱ DNA聚合酶Ⅲ
亚基数目 1(单体酶) >1(多亚基酶 ) ???1(多亚基酶)
5’ 3’聚合活性 + 中 + 很低 + 很高
3‘ 5’外切活性 + + +
(保护DNA复制的
忠实性fidelity)
5‘ 3’外切活性 + - -; 在真核细胞内有五种DNA聚合酶 (与细菌DNA聚合酶的性质基本相同:底物、模板、引物、方向)
α β γ δ ε
定位 细胞核 细胞核 线粒体 细胞核 细胞核
3‘-5’
外切 - - + + +
酶活性
功能; 3 .DNA连接酶(1967年发现):若双链DNA中一条链有切口,一端是3’-OH,另一端是5‘-磷酸基,连接酶可催化这两端形成磷酸二酯键,而使切口连接。
但是它不能将两条游离的DNA单链连接起来。
大肠杆菌和其它细菌的DNA连接酶要求NAD+提供能量,在高等生物和噬菌体中,则要求ATP提供能量。T4噬菌体的DNA连接酶不仅能在模板链上连接DNA和DNA链之间的切口,而且能连接无单链粘性末端的平头双链DNA。;;拓扑异构酶?:使DNA一条链发生断裂和再连接。作用是松解负超螺旋,反应不需要能量。主要集中在活性转录区,同转录有关。;6.其它蛋白因子:;三、DNA的复制过程:(以大肠杆菌为例)
双链的解开
RNA引物的合成
DNA链的延伸
切除RNA引物,填补缺口,连接相邻的DNA片段;1、双链的解开;复制原点由DnaA蛋白识别, 在原点由DnaB蛋白(解螺旋酶)将双螺旋解开成单链状态,分别作为模板,合成其互补链(DNA双链的解开还需DN
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