蛋白质化学课件.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 1952年由Akabori提出的是目前最好的方法 * Trp(色) B、引起蛋白质变性的主要因素： 1.物理因素： 加热、高压、紫外线照射、X-射线、超声波、剧烈振荡和搅拌等 2.化学因素： 强酸、强碱、脲、去污剂（十二烷基硫酸钠（SDS））、重金属盐、三氯醋酸、浓乙醇等。 C、蛋白质的变性后的表现 生物活性丧失；溶解度降低，对于球状蛋白粘度增加；光吸收系数增大；生物化学性质改变。 组分和分子量不变。 D、蛋白质变性的本质： 分子中各种次级键断裂，使其空间构象从紧密有序的状态变成松散无序的状态，一级结构不破坏。 变性后的蛋白质在结构上虽有改变，但组成成分和相对分子质量不变。 E、蛋白质的复性 定义：如果引起变性的因素比较温和，蛋白质构象仅仅是有些松散时，当除去变性因素后，可根据热力学原理缓慢地重新自发折叠恢复原来的构象，这种现象称作复性。 核糖核酸酶变性与复性作用 天然状态，有催化活性 非折叠状态，无活性 8 M 尿素 ?-巯基乙醇 变性 天然状态 –S-S-键恢复 而且是正确配对 复性 去除尿素及?-巯基乙醇 蛋白质在远紫外光区（200-230nm）有较大的吸收，在280nm有一特征吸收峰，可利用这一特性对蛋白质进行定性定量鉴定。 蛋白质质量浓度/（mg/ml）=1.55A1cm - 0.76A1cm 280 260 测定范围：0.1～0.5mg/ml 五、蛋白质的紫外吸收 　 六、蛋白质的颜色反应 双缩脲反应 酚试剂反应 蛋白质定量、定性 茚三酮反应 测定常用方法 另外还有：蛋白黄色反应、米伦氏反应、乙醛酸反应等。 双缩尿在碱性溶液中能与硫酸铜发生反应，产生红紫色络合物，此反应称为双缩脲反应。 (碱性溶液) Cu2+ 红紫色络合物 180°C 1.双缩脲反应 一.?分离纯化蛋白质的意义 1.研究蛋白质的结构与功能： 要求纯度高，不变性； 2.提取活性的酶或蛋白质： 必须保持天然活性状态； 3.作为药物或食品添加剂： 纯度要求一般。 二、蛋白质提纯的总目标： 增加制品纯度或比活力，设法除去变性的蛋白质和其他杂蛋白，且希望所得的蛋白质的产量达到最高值。 第七节 蛋白质的分离提纯 三.蛋白质分离纯化的一般程序 1.前处理 生物组织 破碎、溶解、离心分离 蛋白质提取液 2.粗分级 盐析、等电点沉淀、超滤、有机溶剂分级分离 3.细分级 层析、电泳 精制品 4.结晶 结晶或冻干粉 适宜介质 2、根据溶解度分 等电点沉淀 盐析（常用硫酸铵） 有机溶剂沉淀 3、根据电离性质分 电泳 离子交换层析 1、根据分子大小分 透析或超滤 离心沉淀 凝胶过滤层析 四、分离纯化的方法 4、特异亲和力： 亲和层析 沉降平衡离心法 沉降速度离心法 凝胶电泳法 凝胶过滤层析原理 五、蛋白质的利用 1.在食品方面的利用 牲畜、家禽、鱼的肌肉以及蛋、奶等历来作为美味食物的人类提供大量营养所必需的蛋白质。 “甜味蛋白” 2.在医药方面和利用 如“胰岛素”、“干扰素” 3.在饲料方面的利用 如“叶蛋白” 一、蛋白质通论 一、蛋白质的元素组成 二、蛋白质的分类 三、蛋白质的大小与分子量 四、蛋白质的功能 五、蛋白质构象和蛋白质结构的组织层次 二、蛋白质的基本结构单位—氨基酸 一、蛋白质的水解 二、氨基酸的一般结构特点及其分类 三、氨基酸的两性性质和等电点 四、氨基酸的化学反应 五、氨基酸的旋光性和光吸收 本章总结 三、肽 一、肽与肽键的结构 二、肽单位（二面角） 三、肽链中AA的排列顺序和命名 四、天然存在的活性肽 四、蛋白质的分子结构 一、蛋白质的一级结构（蛋白质一级结构的测定） 二、蛋白质的二级结构与纤维状蛋白（?-螺旋、?-折叠、?-转角、无规卷曲、超二级结构和结构域） 三、