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离心分离 借助离心机旋转所产生的离心力，使不同大小和不同密度的物质分离的技术细胞的收集、细胞碎片和沉淀的分离等常用离心分离超速离心技术已成为分离、纯化、鉴别和各种生物大分子的重要手段之一 一 离心机的种类与用途转速分：常速（低速）、高速和超速1 常速离心机8000r/min, R.C.F1*104g用途：分离细胞、细胞碎片、培养基残渣及粗结晶等较大颗粒2高速离心机1*104g～2.5*104 r/min ，R.C.F 1*104g～105g用途：分离各种沉淀物、细胞碎片及较大的细胞器等高速冷冻离心机3 超速离心机2.5*104g～8*104 r/min ，R.C.F 5*105g或更高结构：离心管帽、冷冻装置和温控系统、真空系统、安全保护系统、制动系统、指示仪表等。按用途分：制备用超速离心机：分离纯化生物大分子、细胞器和病毒等分析用超速离心机：测定样品纯度（根据紫外吸收率或折光率等判断）、沉降系数、相对分子量沉降系数S：单位离心力作用下粒子的沉降速度，以Svedberg表示，简称S。1S=1*10-13s沉降系数S与分子量M有对应关系，测出离心机转速、离心时间和粒子移动距离，可求出S，再得到M二 离心方法的选择对于常速和高速离心机，由于所分离的颗粒大小和密度相差较大，只要选择好离心速度和时间，就能达到分离效果。超速离心的离心方法：差速离心、密度梯度离心和等密度梯度离心 1 差速离心采用不同的离心速度和离心时间，使沉降速度不同的颗粒分批分离的方法。主要用于分离大小和密度差异较大的颗粒。2 密度梯度离心样品在密度梯度介质中进行离心，使沉降系数比较接近的物质得以分离的一种区带分离方法。密度梯度系统：梯度介质有足够大的溶解度，不与分离组分反应，不会引起分离组分的凝集、变性或失活。常用介质：蔗糖、甘油等。样品铺在密度梯度溶液表面，离心后形成若干条界面清楚的不连续区带。3 等密度离心当欲分离的不同颗粒的密度范围在离心介质的密度梯度范围内时，不同浮力密度的物质颗粒在离心力作用下一直移动到与各自浮力密度相等的位置（等密度点），形成区带。等密度离心常用的介质：铯盐，如CsCl，Cs2SO4，CsBr三 离心条件的确定离心力（转速）离心时间温度pH值 思考题1 名词解释 离心分离 相对离心力 沉降系数2 按离心机转速分，离心机有哪些种类？各自的适用范围是什么？3 超速离心方法有哪些？4 离心操作应注意控制哪些条件？离心转速和沉降时间有何关系？ 过滤与膜分离技术过滤：借助一定孔径的过滤介质，将不同大小颗粒物质分离的方法。主要驱动力为压力差。常压过滤、加压过滤、减压过滤过滤介质：滤纸、滤布、纤维、多孔陶瓷、烧结金属等助滤剂：硅藻土、活性炭、纸粕等条件控制：压力差、粘度、浓度、温度、pH等。生化中的膜分离技术膜分离技术是借助一定孔径的高分子薄膜，将不同大小、不同性状和不同特性的物质颗粒或分子分离的技术。优点：能耗低、不经相转换、操作方便等。膜分离驱动方式：压力、浓度差、电动势、化学位能等。可分为反渗透、超滤、微滤、透析、电渗析等。 一 压力差为推动力的膜过滤技术1 分类（1） 微滤（MF）截留颗粒直径0.2～2μm，可除去淀粉、细菌、霉菌、乳化油等。（2） 超滤（UF）截留颗粒直径0.02～0.22μm，相当于分子量1000～5×105道尔顿。可滤出蛋白质、脂肪、病毒、树脂和色素物质。（3）反渗透被截留物质分子量小于1000道尔顿，只允许溶解质或水通过，被形容为脱水浓缩技术。2 原理3操作注意问题（1） 膜的选择与安装（2）?????? 溶液性质和流动状态（3）?????? 浓差极化和膜堵塞（4）?????? 温度、pH值选择（5）?????? 膜的清洗4 应用可单独或联合使用，达到以下目的：悬浮微小颗粒的除净；大分子溶质的除去；大分子溶液的浓缩；大分子溶液的分级等。微滤在食品饮料等的澄清和除菌中应用最广；超滤在生物大分子分级中应用越来越多，如浓缩提取菠萝蛋白、糖化酶、生物表面活性剂鼠李糖酯等，在果汁、蔬菜汁、牛奶等的浓缩和果酒等的澄清中使用广泛。 二 其它膜分离技术1 电渗析原理应用海水淡化、溶液脱盐等。可提高发酵液中谷氨酸收得率。2透析原理应用生物大分子分离纯化，除去小分子、脱盐等。实际应用例子：人工肾思考题什么叫膜分离技术？压力差为推动力的膜分离技术主要有哪些？膜分离技术有何应用？举例说明。 萃取分离技术利用物质在两相中的溶解度不同而使其分离的技术。一 有机溶剂萃取注意防止变性：温度，接触时间1有机溶剂选择2操作：萃取，分离二双水相萃取双水相是由两种互不相溶的高分子溶液或互不相溶的盐溶液和高分子溶液组成。分配系数的大小决定了萃取分离的效果。可采取修饰高分子聚合物的方式提高分配系数。三 超临界萃取超临界流体：在温度和压力超过某物质的超