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激光微束穿孔转化法 超声波处理转化法 脂质体介导转化法 体内注射转化法 花粉管通道转化法 精子介导法 低能离子束介导转化法 基因工程 外源DNA转化方法 电穿孔仪 病毒(噬菌体)颗粒转导法 用病毒(噬菌体)的 DNA（或cDNA）构建成重组DNA，在体外包装成重组病毒(噬菌体) 颗粒，通过感染使重组DNA进入受体细胞。 基因工程 2.5.2 重组DNA分子导入受体细胞 方式： 重组病毒直接感染受体细胞 重组病毒同另一辅助病毒一起感染受体细胞 重组病毒感染互补型受体细胞系 适用：主要用于基因组文库或cDNA文库的构建和动植物的转基因。 基因工程 病毒(噬菌体)颗粒转导法 基因工程 病毒(噬菌体)颗粒转导法 2.5.3 克隆子的筛选 根据载体标记基因筛选转化子 根据载体抗菌素抗性基因筛选转化子 根据载体除草剂抗性基因筛选转化子 根据LacZ′基因互补显色筛选转化子 根据生长调节剂非依赖型筛选转化子 根据核苷酸合成代谢相关酶基因缺失互补筛 选转化子 基因工程 2.5 目的基因导入受体细胞 根据报告基因筛选转化子 β-葡萄糖酸苷酶基因（gus） 萤火虫荧光素酶基因（luc） 绿色荧光蛋白基因（gfp） 根据形成噬菌斑筛选转化子 基因工程 2.5.3 克隆子的筛选 2.6.1 根据重组DNA分子特征鉴定重组子 根据重组DNA分子大小鉴定重组子 根据重组DNA分子酶切图谱鉴定重 组子 根据PCR扩增片段鉴定重组子 基因工程 2 基因工程 2.6 重组子的鉴定 采用DNA分子杂交法鉴定重组子 Southern 印迹杂交 斑点印迹杂交 菌落（或噬菌斑）原位杂交 基因工程 2.6.1根据重组DNA分子鉴定重组子 基因工程 采用DNA分子杂交法鉴定重组子 Southern 印迹杂交 基因工程 采用DNA分子杂交法鉴定重组子 菌落（或噬菌斑）原位杂交 基因工程 采用DNA分子杂交法鉴定重组子 基因工程 2.6.1根据重组DNA分子鉴定重组子 应用ＤＮＡ芯片鉴定重组子 基因工程 2.6.1根据重组DNA分子鉴定重组子 根据DNA序列鉴定重组子 2.6.2 根据外源基因转录产物mRNA鉴定重组子 根据RT-PCR 扩增片段鉴定重组子 采用RNA分子杂交法鉴定重组子 Northern印迹杂交法 斑点印迹杂交 菌落（或噬菌斑）原位杂交 基因工程 2.6 重组子的鉴定 2.6.3 根据目的基因翻译产物蛋白质（酶）、多 肽鉴定重组子 蛋白质凝胶电泳法鉴定重组子 单向凝胶电泳 双向凝胶电泳 毛细管等电点凝胶电泳 免疫检测法鉴定重组子 酶联免疫吸附法 Western印迹法 固相放射免疫法 免疫沉淀法 质谱分析法 基因工程 2.6 重组子的鉴定 酶标仪 基因工程 2.6.3 根据外源基因翻译产物蛋白质（酶）、多肽鉴定重组子 基因工程 2.6.3 根据外源基因翻译产物蛋白质（酶）、多肽鉴定重组子 2.7.1基因工程的应用 基因工程药物 转基因植物 转基因动物 基因工程 2 基因工程 2.7 基因工程技术应用与安全性问题 2.7.2 基因工程的安全性问题 对转基因生物安全性的争论 应正确认识转基因生物的利与弊 转基因生物的安全管理 基因工程 2.7 基因工程技术应用与安全性问题 转基因猪 基因工程2 基因工程 1. 基因工程研究的理论依据是什么? 2. 简述基因工程研究的基本技术路线。 3. 简述限制性内切核酸酶和DNA连接酶的作用机制。 4. 在什么情况下最好使用质粒载体或λ噬菌体载体或cosmid载体？ 5. 阐述人工染色体作为载体的特点。 6. 简述染色体定位整合克隆载体的应用价值 7. 简述各种特殊用途克隆载体的特点 8. 从cDNA文库和基因组文库中获得的目的基因有什么不同？ 9. 如何采用PCR技术从生物材料中分离出目的基因？ 10. 什么样的细胞可用作受体细胞？ 11. 阐述外源基因转入受体细胞的各种途径。 12. 筛选克隆子有