分光光度计的原理与应用.pdfVIP

分光光度计的原理与应用 分光光度计就是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪 器。它是现代实验室检测用的常规仪器。常用于核酸、蛋白定量以及 细菌生长浓度的定量。在印染方面，我们可以用分光光度计测量染色 时染料的上染百分率，以及整理在织物上助剂的浓度，还可以用于颜 色的测量。同时它还广泛地应用于食品检测、农药的检测及工业上石 油的检测等。紫外可见分光光度计在实验中的应用非常广泛，故我们 要熟悉并掌握它的原理及应用。 一、分光光度计的组成 各种型号的可见分光光度计，就其基本结构来说，都是由五个基 本部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器及信号指示系统。 1.光源 在紫外可见分光光度计中，常用的光源有两类：热辐射光源和气 体放电光源。热辐射光源用于可见光区，如钨灯和卤钨灯；气体放电 光源用于紫外光区，如氢灯和氘灯。 2 ．单色器 单色器的主要组成：入射狭缝、出射狭缝、色散元件和准直镜等 部分。单色器质量的优劣，主要决定于色散元件的质量。色散元件常 用棱镜和光栅。 3.吸收池 吸收池又称比色皿或比色杯，按材料可分为玻璃吸收池和石英吸 —————————————————————————————————————— 收池，前者不能用于紫外区。吸收池的种类很多，其光径可在 0.1 ～ 10cm 之间，其中以 1cm 光径吸收池最为常用。 4 、检测器 检测器的作用是检测光信号，并将光信号转变为电信号。现今使 用的分光光度计大多采用光电管或光电倍增管作为检测器。 1 5 、信号显示系统 常用的信号显示装置有直读检流计，电位调节指零装置，以及自 动记录和数字显示装置等。 二、分光计的分类 国际上一般按紫外可见分光光度计的仪器结构将其分为单光束、 准双光束、双光束和双波长四类。 单光束可见分光光度计光度准确度差。常见的 721 、751 、753 、 754 等可见分光光度计都是单光束仪器，因为他们的分析误差较大， 所以, 它们在使用上受到限制。一般来讲, 对要求较高的制药行业、 质量检验行业、科研等行业不适宜使用单光束紫外可见分光光度计。 准双光束紫外可见分光光度计有两种类型: 一种是两束单色光, 一只比色皿, 两只光电转换器; 另一种是一束单色光, 一束复合光, 一只比色皿, 两只光电转换器。常见类型有 TU-1800 、TU-1800S 、 TU-1800PC 、TU-1800SPC 、UV-762、UV-1600 等。 双光束紫外可见分光光度计就是有两束单色光的紫外可见分光 光度计。它有两种类型: 一种是两束单色光, 两只比色皿, 两只光电 —————————————————————————————————————— 转换器; 另一种是两束单色光, 两只比色皿, 一只光电转换器。目前, 国内外的双光束紫外可见分光光度计中, 两只光电转换器的双光束 紫外可见分光光度计仪器已很少见。 双波长紫外可见分光光度计都采用两个单色器。光源发出的光被 两个单色器分别分离出波长为λ1 和λ2, 通过斩波器将两束单色光 λ1 和λ2 交替入射到同一试样中, 光电倍增管交替地接收到经过 试样吸收后的这两束单色光, 并把它们变成电信号。常见的类型有 WFZ800-5 ，UV-265。 三、原理及测试方法 原理：朗伯- 比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的 稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即 A= εLc 式中比例常数ε与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有 关。c 为吸光物质浓度，L 为透光液层