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ELISA实验原理方法仪器流程图和注意事项分析会计学第1页/共13页酶联免疫吸附实验(ELISA)第2页/共13页 目的和要求掌握ELISA的原理、操作过程及注意事项了解ELISA实验结果的读取和分析第3页/共13页实验原理借助酶标记抗体（或抗原）在体外与抗原（或抗体）结合，通过相应底物被酶解后出现显色反应。反应颜色深浅与抗原（或抗体）量的多少有关。特点：灵敏、特异类型： 双抗体夹心法、竞争法、间接法等第4页/共13页 双抗夹心法ELISA第5页/共13页 竞争法 ELISA第6页/共13页第7页/共13页实验材料BSA包被的测定板酶标抗鼠IgG抗体待检血清，阳性血清，阴性血清洗涤液： PBS＋吐温-20底物液：邻苯二胺（OPD）终止液：10% H2S04第8页/共13页实验步骤加入稀释好的待测血清每孔100ul， 37℃孵育40min洗板3次,每次1min加入100ul酶标抗体, 37℃孵育30min洗板3次,每次1min第9页/共13页实验步骤加入100ulTMB底物液避光室温孵育15min终止反应:每孔加1滴10％硫酸结果观察第10页/共13页第11页/共13页注意事项加样：应将所加物加在ELISA板孔的底部，并注意不可溅出，不可产生气泡。洗板：每次洗液加入后，应静置1分钟使清洗更加彻底。末次洗板尽量将水甩干。液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。底物有毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，尽量避免接触。第12页/共13页血清稀释及加样将待测血清1:100稀释后，再做倍比稀释到各孔，每孔100μl，见表。注意混匀。1:1001:2001:4001:8001:16001:32001:64001:12800阴性血清阴性血清1:1001:2001:4001:8001:16001:32001:64001:12800阳性血清阳性血清100ul因为ELISA 是抗原与抗体反应，所以特异性很高ELISA又是借助了酶的放大反应，所以灵敏度高
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