MicroRNAletC在肝细胞癌中的表达及其临床意义.pptxVIP

会计学1MicroRNAletC在肝细胞癌中的表达及其临床意义 2011年CSCO年会　厦门 ☆原发性肝细胞癌是一种高度恶性的肿瘤，每年超过 60万人死于本病，且每年新发病例62.6万，其中55% 发生在中国。☆当前诊断肝癌的生物标志物主要是甲胎蛋白（AFP）， 但仍 有30%患者AFP阴性或低度阳性。☆ 肝癌术后5年生存率仅为30% ～40%。第1页/共26页 2011年CSCO年会　厦门因此，早期诊断一直是肿瘤学研究的热点，那么探索肿瘤早期生物标志物则为一个良好的选择。又一个AFP？？？早期发现、早期治疗是提高肝癌生存期的关键！第2页/共26页 2011年CSCO年会　厦门近年来，越来越多疾病的miRNA表达谱已被确立，通过与正常表达谱的对比证实了miRNA与人类重大疾病（如：肿瘤、艾滋病、心血管系统疾病、神经系统疾病、糖尿病等）的发生发展存在相关。 微小RNA（miRNA）是一类进化上保守的长度约21-25个核苷酸的非编码单链小分子RNA。 第3页/共26页 2011年CSCO年会　厦门Let-7miRNA是目前研究最为广泛的miRNA之一，其在肺癌，直肠癌等的研究中，let-7被证明是一个抑癌因子。但到目前为止，let-7与肝癌的诸多临床病理特征的关系很少研究。第4页/共26页 2011年CSCO年会　厦门本文通过Real time-PCR方法检测了32例肝细胞肝癌中的let-7c的表达，分析其与临床病理特征的关系，探讨let-7C在肝细胞肝癌中的作用。第5页/共26页 2011年CSCO年会　厦门一、材料与方法1.标本来源※32例标本取自浙江大学医学院附属第一医院肿瘤外科 2008.8到2009.8月手术切除的肝癌及其癌旁组织。※标本均经过病理科医师证实为肝细胞肝癌。※肝癌标本取自病灶中央无坏死部分，另取距肿瘤边缘大 于3cm的癌旁非肿瘤组织，离体后立即切成小块，于 10min中内放于液氮中保存，后转存于-80℃冰箱。※标本的获得均取得患者本人及其家属的同意。第6页/共26页 2011年CSCO年会　厦门2.临床资料男性20例，女性12例。患者年龄在28岁到69岁之间，中位年龄50岁。具体临床病理资料如表1所示。第7页/共26页 2011年CSCO年会　厦门标本号性别年龄HBV肝硬化AFP大小数目分化包膜PVTT012211121211021112211122031211211112041112112122..................302112111112312112121111321211211222表1 . 32例肝癌患者临床病理资料性别：1男性，2女性, 年龄：1≤50岁，2＞50岁HBV：1阳性，2阴性, 肝硬化：1阳性，2阴性AFP：1阳性，2阴性, 大小：1≤5cm，2＞5cm数目：1单发，2多发, 分化：1 高、中分化，2 低分化包膜：1阳性，2阴性, PVTT：1阳性，2阴性第8页/共26页 2011年CSCO年会　厦门3.主要试剂mirVana miRNA Isolation Kit（Abmion公司，美国）TaqMan MicroRNA Reverse Transcription Ki（Applied Biosystems公司，美国）TaqMan Universal PCR Master Mix, No AmpErase UNG（Applied Biosystems公司，美国）TaqMan MicroRNA Assays（has-mir-let-7c、U6 snRNA）（Applied Biosystems公司，美国）第9页/共26页 2011年CSCO年会　厦门4. 实验方法RNA抽提：???? 破碎组织→分离RNA→沉淀RNA→洗涤RNA→融解RNA→保存RNA。第10页/共26页 2011年CSCO年会　厦门逆转录反应体系:组分体积（ul）/15ul反应体系100mM dNTPs（with dTTP）0.15MultiScribe Reverse Transcriptase（50U/ul）1.0010×Reverse Transcription Buffer1.50RNase Inhibitor（20U/ul）0.20Nuclease-free water4.15Total RNA5.00Specific miRNA（or U6 snRNA） RT primer3.00Total15.00逆转录反应体系：冰上孵育5min。第11页/共26页 2011年CSCO年会　厦门组分体积（ul）/20ul 反应体系TaqMan MicroRNA Assay（20×）1.00cDNA1.33TaqMan 2× Universal