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可编辑 狂犬病病毒实验室检测方法 摘要：狂犬病（Rabies）是一种重要的人兽共患传染病，由狂犬病病毒（Rabies virus，RV）感染温血动物和人后引起，近年来又有感染上升的趋势。一种准确、 灵敏、快速的实验室检测诊断方法就显得极为重要。现就酶联免疫吸附试验 （ELISA）、荧光抗体方法（FA ）、快速荧光抑制灶技术（RFFI ）、反转录－聚合 酶链反应 （RT-PCR）、荧光定量 RT-PCR，基因芯片技术和恒温扩增技术等狂犬病 病毒实验室诊断方法做一综述。 关键词：狂犬病 狂犬病病毒 检测方法 狂犬病（Rabies）是一种重要的人兽共患传染病，由狂犬病病毒（ Rabies virus，RV）感染温血动物和人后引起，以恐水、畏光、吞咽困难、狂躁、急性 致死性脑脊髓炎，进行性麻痹和最终死亡为主要临床特征。RV 可感染多种温血 动物引起死亡，表现为高度嗜神经性。脑组织感染 RV 后遭到破坏，使得狂犬病 感染的病死率几乎 100%。 据 WHO 数据显示狂犬病在全世界 150 个国家和地区出现过狂犬病病例。尽管 狂犬病可以通过疫苗免疫进行预防，全世界每年仍有超过 5.5 万人死于该病， [1] 主要集中在亚、非、拉等发展中国家 。中国狂犬病疫情较严重，居世界第2 位 [2~3] [4] ，近年来，狂犬病疫情呈现回升的趋势 。检测狂犬病抗原抗体、分析狂犬病 的流行特点，并建立高效、快速、可靠的实验室检测方法可以有效控制此病的流 行。下面主要针对 RV 的形态特征和分子结构及主要的检测技术进行概述。 1、狂犬病病毒形态特征 RV 属于弹状病毒科（Rhabdoviridae）狂犬病病毒属（Lyssavirus）血清/ 基因 1 型，单股负链 RNA 病毒。电镜下观察病毒粒子直径为70～80nm，长 160～ [5] 240nm，一端钝圆，另一端平凹，整体呈子弹状 。病毒有双层脂质外膜，其外 面镶嵌有 1072-1900 个 8-10nm 长的纤突 (spike)，为糖蛋白，每个糖蛋白呈同源 三聚体形式，电镜还显示了糖蛋白具有“头”和“茎”结构。病毒双层脂质包膜 的内侧主要是膜蛋白 精品 可编辑 ，亦称基质蛋白(Matrix，简称M)，是狂犬病毒的最小结构蛋白。病毒的中 央核心是一个直径为 40nm 的核衣壳，核衣壳(Nucleocaps)由病毒核酸(-ssRNA) 和紧密包在其外面的蛋白组成，呈紧密的连续性螺旋形式，它充满在由脂蛋白外 壳形成的空间内，有 30 一 35 个卷曲。每个病毒约有 1800 个紧密排列的核蛋白。 另外两种核衣壳核心的蛋白为大转录酶蛋白或称 RNA 多聚酶(Polymerase，简称 L)和磷蛋白 (Phosphoprotein，简称 P)。N、P 和 L 三种蛋白总称为核糖核酸蛋白 [6] (Ribonueleoprotein，简称 RNP) 。 2、狂犬病病毒基因组结构 6 RV 基因组为不分节段的单股负链 RNA，分子质量约为 4.6×10 ，大小约为 12kb，由 7 个功能区组成，包括 3′先导区、5 个连续的结构基因和 5′非转录 区。其中约 91％的核苷酸为结构基因，由 3′端 poly （A）→5’ 端 AACA 依次 为 N、P、M、G、L，其长度分别为 1421、991、804 或 805，1675 或 2059、2069， 和 6429 或 6384 个核苷酸，对应的开放读码框（ (Open reading frame ,ORF） 大小依次为 1353、894、609、1575、6429 个核苷酸，分别编码核蛋白（NP）、磷 蛋白（PP）、基质蛋白（MP）、糖蛋白（GP）和依赖 RNA 的 RNA 多聚酶（LP）。在 狂犬病病毒 3 ˊ端有一段