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会计学1分子实验基本操作培训教学 Outline分子实验基本流程介绍分子实验基本操作的原理、步骤及注意事项总结第1页/共17页 分子实验基本流程介绍感受态的制备PCR克隆目的片断酶切及酶切片断回收（电泳）连接小提质粒并酶切鉴定（电泳）大肠杆菌的培养转化第2页/共17页 分子实验基本流程介绍感受态的制备PCR克隆目的片断酶切及酶切片断回收（电泳）转化连接小提质粒并酶切鉴定（电泳）大肠杆菌的培养第3页/共17页 分子实验基本操作——大肠杆菌的培养原理 大肠杆菌在37 ℃下在较好较快的进行增殖， 4 ℃下则可较好停止代谢，便于保存。（长期保存应在-80 ℃ 用15-20%甘油冻存） 由于转入的质粒带有抗性标记，用带有抗生素的培养基即可进行选择性培养。分为固体培养基培养和液体培养基培养 第4页/共17页 分子实验基本操作——大肠杆菌的培养Step0: LB培养基的配制(1L培养基含) 10g Tryptone 5g Yeast Extract 10g NaCl 15g Agar (仅在固体培养基中加入，注意琼脂为Agar琼脂糖/Agarose区分) 1L 去离子水一般一瓶配100-300mLStep0’: 灭菌（此后一切保持无菌操作） 第5页/共17页