分光光法检测蛋白质含量.pptxVIP

会计学;生物化学与分子生物学实验;实验室规则;实验室安全及防护;实验室常用玻璃仪器;实验考试;实验报告网上提交;实验一;理论 掌握分光光度技术的基本原理 了解分光光度计的基本构造 实验: 利用分光光度技术进行蛋白质含量测定 ; 一、概念 利用物质特有的吸收光谱来鉴别物质或测定其含量的一项技术 。 应用：定性、定量 优点：灵敏度高 精确度高 操作简便、快速 ;二、工作原理 物质对光线有选择性吸收作用。 每种物质都具有其特征性的吸收光谱。 在一定条件下，物质对光的吸收程度与该物质 的浓度成正比。 ;如何定性？ —利用吸收光谱曲线鉴定化合物; 1.朗伯（Lambert）定律 一束单色光通过一光吸收介质时，其光强度随吸收光介质的厚度增加呈指数减少。 I1/I0=e-K1l 2.比尔（Beer）定律 一束单色光通过一光吸收介质时，其光强度随吸收光介质的浓度的增加呈指数减少。 I1/I0=e-K2C I0 :入射光强度； I :透射光强度；l ：介质厚度 C ：介质浓度; ;4.计算*** （1）标准管法（标准比较法） 实际测定过程中，用一已知浓度的测定物按测定管同样处理显色，读出吸光度