分子生物学常用技术及其应用学习.pptxVIP

会计学;第一节 基因工程;二、工具酶 限制性核酸内切酶：能从中间有选择性地切割DNA分子特异序列。 DNA连接酶 DNA聚合酶 逆转录酶多核苷酸激酶 碱性磷酸酶 末端脱氧核苷酸转移酶 ;三、载体 载体必须符合以下几点要求： （1）能在宿主细胞内复制并具有较高的拷贝数 （2）容易进入宿主细胞 （3）具有多个限制性核酸内切酶单一的酶切位点 （4）容易从宿主细胞中分离纯化 （5）有容易被识别筛选的标志 常用的载体包括：质粒、λ噬菌体、粘粒、病毒 ;四、重组DNA技术的基本原理 制备DNA片段，并通过载体将其导入受体细胞，在受体细胞中复制、扩增，以获得单一DNA分子的大量拷贝。 ;五、重组DNA技术的基本过程 （一）制备目的基因和载体； （二）DNA的重组； （三）重组DNA导入宿主细胞 （四）DNA重组体的筛选和鉴定 （五）DNA重组体的 扩增和表达 ;（一）目的基因的 制备： 目的基因的筛选和分离可采用以下方法进行： 1．直接从染色体DNA中分离： 仅适用于原核生物基因的分离，较少采用。 ;2．人工合成： 根据已知多肽链的氨基酸顺序，利用遗传密码表推定其核苷酸顺序再进行人工合成。适应于编码小分子多肽的基因。 ;3．从mRNA合成cDNA： 采用一定的方法钓取特定基因的mRNA，再通过逆转录酶催化合成其互补DNA（cDNA），除去RNA链后，再用DNA聚合酶合成其互补DNA