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找答案？;前言;核酸的分类： DNA 核内染色体 DNA。 核外也有少量DNA，如线粒体DNA，叶绿体DNA。 质粒DNA。 RNA 存在于细胞质中，如mRNA, rRNA, tRNA等。 除上述DNA，RNA外，还有非细胞形式存在的病毒和噬菌体，其或只含DNA，或只含有RNA。;主要内容;1. 核酸分离与纯化的原则及要求;;;;(2) 核酸纯度的要求： 非核酸生物大分子的污染降低到最低程度，如蛋白质、多糖和脂类分子； 排除其它核酸分子的污染，如制备RNA时，DNA分子是污染物； 去除对后续实验有影响的物质，如有机溶剂和过高浓度的金属离子。;2. 核酸制备的基本步骤 ;2.1 破碎细胞;2.2 核酸分离，去除蛋白;（3）酚/氯仿抽提 酚／氯仿混合使用能增加去除蛋白的效果，并对核酸酶有抑制作用。 氯仿比重大，能加速有机相与水相分层，减少残留在水相中的酚，同时氯仿具有去除植物色素和蔗糖的作用。 在酚/氯仿抽提核酸提取液时，需要振摇，为防止起泡和促使水相与有机相的分离，再加上一定量的异戊醇（酚：氯：异戊醇=25：24：1）。; (1）使用注意 酚通常是透明无色的结晶，如果酚结晶呈现粉红色或黄色，表明其中含有酚的氧化产物，例如醌、二酸等。变色的酚不能用于核酸抽提实验，因为氧化物可破坏核酸的磷酸二酯键。 (2）安全操作 酚腐蚀性很强，并可引起严重的灼伤，操作时应戴手套。;2.3 沉淀核酸;Na+;核酸沉淀的盐类及浓度;乙醇 优点： 对盐类沉淀少，沉淀中所含迹量乙醇易挥发除去，不影响以后实验。 缺点： 需要量大，一般要求低温操作。 异丙醇 优点： 需体积小，速度快，适于浓度低、体积大的DNA样品沉淀。一般不需低温长时间放置。 缺点： 易使盐类、蔗糖与DNA共沉淀．异丙醇难以挥发除去。所以，最后用70％乙醇漂洗数次。;聚乙二醇（PEG）;精胺; 2.3.2 核酸沉淀的温度和时间;3.1 紫外分光光度法鉴定核酸;a．分光光度计先用一定量的水校正零点。 b．吸取一定量的DNA样品或RNA样品，加入到盛有一定体积水的石英比色杯中。 c．测定待测样品在230nm、260nm和280nm的OD值 d．计算浓度。 双链DNA样品浓度(μg/μl) = OD260×核酸稀释倍数× 50/1000； RNA样品浓度(μg/μl) = OD260×核酸稀释倍数×40/1000。 e．分析纯度。 ;A：测DNA： 纯的DNA样品OD260/OD280=1.8 （1.7~1.9） OD260m/OD2302.0 1) OD260/OD2801.9, RNA污染。 2) OD260/OD2801.6，存在蛋白质或酚污染； 3) OD260/OD2302.0，溶液中有残存的盐和小分子杂质，如核苷酸、氨基酸等。 注： 可能出现既含蛋白质又含RNA的DNA溶液比值为1.8的情况。;B：测RNA 纯的RNA样品OD260／OD280=2.0(1.7~2.0) OD260/OD2302.0 1）OD260/OD280比值太小，蛋白质或酚的污染； 2）OD260/OD280 2.0，可能被异硫氰酸胍等污染； 3）OD260/OD2302.0，表明有小分子及盐存在。;3.2 荧光光度法鉴定核酸;核酸鉴定实际常用操作程序;(1) 对DNA ① DNA样品溶于pH8.0的TE，4 ℃或-20 ℃保存； ② 长期保存样品中可加入1滴氯仿。 (2) 对RNA ① RNA样品溶于0.3 mol/L NaAc (pH5.2)或双蒸灭菌水中，-70 ℃保存; ② 可以沉淀形式贮于乙醇，可在-20 ℃中长期保存; ③ 最常用无Rnase水或高压后的DEPC水溶解RNA，冻贮于-70~-80 ℃。;4、核酸提取方法简单介绍;4.1 基因组DNA的提取方法;原理： 在正常情况下，核酸表面覆盖了一层由水分子组成的亲水 薄膜，以维持其水溶性。高浓度盐离子的加入破坏了核酸 表面亲水薄膜的相对有序排列，形成了疏水环境。在此环 境中，核酸与硅胶膜能有效结合，而蛋白质、代谢产物和 其他污染物则不能结合。 特点： 不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 快速，简捷。 ;裂解液+蛋白酶K 裂解细胞;甲酰胺解聚法：细胞裂解步骤与酚抽提法一致，但以高浓度甲酰胺裂解液裂解DNA与蛋白质复合体，再以透析除去杂质 玻璃棒缠绕法：将基因组DNA沉淀缠绕于带钩玻璃棒上带出，溶于pH8.0的TE 异丙醇沉淀法 玻璃珠吸附法;透析，沉淀，电泳，选择性沉淀 ;4.2 质粒的提取和纯化;4.2.1 质粒提取原理4.2.2 质粒DNA的纯化与回收;4.