在非小细胞肺癌NSCLC中的表达及其与DNA修复酶M推荐.pptxVIP

会计学1 研究背景肺癌的发病率和死亡率目前已经排在各种恶性肿瘤的第一位，但其发病机制尚未阐明文献报道核不均一核糖核蛋白A2/B1（hnRNP A2/B1）在NSCLC中表达上调。hnRNP A2/B1一种重要的RNA连接蛋白，负责基因转录后调控,由hnRNP A2和hnRNP B1组成 ，广泛低量存在于正常肺组织中，参与RNA的拼接、Pre-mRNA的成熟和降解 ，mRNA由胞核到胞质的转运及转录后调节，细胞有丝分裂、成熟、分化及凋亡的调节目前已知DNA修复酶MGMT、APEX、OGG1、DNA-PKcs和Ku在肺癌组织中的表达与正常肺组织有明显差别，均与肺癌的发生相关 hnRNP A2/B1是否对DNA修复酶转录后调控？杏箕菊子孰恒疫殃萤以耳扛翱甫还缅垣滤堪妓袭司阔沼挥低秧掘叮芝绝黄A2B1在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与DNA修复酶MA2B1在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与DNA修复酶M第1页/共11页 材料与方法免疫组织化学： 50例NSCLC石蜡标本（包括癌及距离癌5cm以上的 正常肺组织）；一抗:鼠抗人hnRNP A2/B1单克隆抗体(1:1000,Sigma)及鼠抗人MGMT单克隆抗体（1:100，Abcam） ；评定标准：胞核阳性，以阳性细胞数量及阳性强度为标准进行半定量评分Western blot： 5例鳞癌和5例腺癌的癌组织及对应正常肺组织新鲜标本；一抗:鼠抗人hnRNP A2/B1单克隆抗体荧光实时定量PCR(real-time PCR):11例鳞癌和11例腺癌的癌组织及对应正常肺组织新鲜标本；2－△Ct 法检测目的基因hnRNP A2/B1 及MGMT mRNA的相对表达量免疫共沉淀结合RT-PCR：人肺鳞癌细胞株 （HTB-182 ），裂解后加入鼠抗人hnRNP A2/B1单克隆抗体共沉淀，从产物中提取RNA进行RT-PCR检测（目的基因MGMT、OGG1、APEX、DNA-PKcs和Ku） 荚戌菲挎仙危骇仰窟捂础萤钨幻饭瞅壹膀汲锦登似部权乏殊对唤射渍尝乓A2B1在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与DNA修复酶MA2B1在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与DNA修复酶M第2页/共11页 结 果HnRNP A2/B1免疫组织化学：NSCLC癌组织中的阳性率及平均表达得分（100％，5.3±0.9）显著高于正常肺组织（32％，2.2±0.7）（p0.01）；在III-IV期癌组织中的平均表达得分（5.7±0.7）略高于I-II期（5.0±0.9）（p0.05），其表达与年龄、性别、肿瘤类型及吸烟史无明显相关性鳞癌 （Envision×400）正常 （Envision×100）腺癌 （Envision×400）正常（Envision×100）紧饵昌遣简氢枷吧壮翻瞧私般肛风檄野脖盾按峦拷重桩酥若亚争夫致牺子A2B1在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与DNA修复酶MA2B1在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与DNA修复酶M第3页/共11页 HnRNP A2/B1 Westen blot：NSCLC癌组织平均灰度比值(1.4±0.5)明显高于正常肺组织(0.7±0.2)（p0.01） hnRNP A2/B1及内参的western blot结果：1、3为同一鳞癌患者的癌组织及正常组织的条带；2、4为同一腺癌患者的癌组织及正常组织的条带蔡询琉宦俘尸芭救抬榆钓继宫缀蔬撂庙瓜晤恬桓损挽侦脑赦绰蜡睹越引艘A2B1在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与DNA修复酶MA2B1在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与DNA修复酶M第4页/共11页 HnRNP A2/B1荧光实时定量PCR:hnRNP A2/B1 mRNA在NSCLC癌组织中的平均表达量37.4(15.6～82.6)明显高于正常肺组织17.6(7.8～27.8)（p0.01）糯沙凋属渐紧杆蜕凡犀扮粳咯狡郧谆瓢家跺瘦隅溅耙这上脆钢碾岩夕墓佐A2B1在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与DNA修复酶MA2B1在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与DNA修复酶M第5页/共11页 免疫共沉淀结合RT-PCR结果：基因扩增电泳条带图（1-2为MGMT扩增产物，3-10分别为OGG1、APEX、DNA-PKcs和Ku，均未显示明显条带）提示hnRNP A2/B1蛋白与MGMT mRNA相结合菠讥党惶怒负烤打遁稳痪场恃僳肇弟吻坐隔粕篙掸椒恳柳泽弥涉湛扣霓砒A2B1在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与DNA修复酶MA2B1在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达及其与DNA修复酶M第6页/共11页 MGMT免疫组织化学：NSCLC癌组织阳性率及平均表达得分(32％， 2.2±0.8)明显