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会计学1基因工程技术在改进微生物菌种方面的应用
(一) 提高次级代谢产物的产量基因工程技术提高抗生素产量的主要手段1. 增加限速酶的基因拷贝数2. 增加正调节基因,去除负调节基因3. 增加抗性基因的拷贝数第1页/共41页
1. 增加限速酶的基因拷贝数原理： Ea Eb Ec Ed A B C D E ( 代谢产物） 限速酶 Rate-limiting Bottleneck Ea Eb Ec 例1: 起始原料 ACV三肽 异青霉素N 青霉素 ?-aminoadipic acid L-cysteine Ea: ACV合成酶 Ec:异青霉素N酰基水解酶 L-valine Eb:异青霉素N合成酶 青霉素酰基转移酶 第2页/共41页
异青霉素N合成酶对青霉素产量的影响 菌株 原始菌株 低产菌株 高产菌株 Wis 54-1255 AS-P-78 IPNS 的基 1 ---- 9-14 因拷贝数 mRNA量 1 ---- 32-64 青霉素产量 100% 导入带IPNS 140% 的基因片段 第3页/共41页
增加IPNS基因提高青霉素产量转化青霉素产生菌 Wis54-1255转化菌株青霉素V产量提高40%第4页/共41页
例2. 头孢菌素C生物合成的限速酶 在头孢菌素C 的工业发酵生产中，人们发现发酵结束后在得到的发酵液中，除了主要产物是头孢菌素C外，在发酵液中还积累另一种产物-青霉素N。 问题：积累中间产物-青霉素N 原因：下一步反应为限速酶反应 解决：导入额外的扩环酶/羟化酶基因 结果：使头孢菌素C的产量提高 25-50%， 积累的青霉素N消失。 第5页/共41页
增加限速酶基因提高头孢菌素C产量转化 转化后菌株头孢菌素C产量提高25-50%第6页/共41页
增加限速酶的其它例子-3:例3. 十一烷基灵菌红素 产生菌:天蓝色链霉菌 A3(2
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