分子生物学原理-DNA的生物合成.pptxVIP

中心法则的研究过程1/28/2023分子生物学原理第1页，共39页。 第三篇 基因信息的传递遗传信息流动方向－中心法则1/28/2023分子生物学原理第2页，共39页。 半保留复制模式的实验证明1/28/2023分子生物学原理第3页，共39页。 第十章 复制半保留复制：DNA进行复制时，双螺旋结构解开而成为两股单链，各自作为模板，用于合成新的互补链。子代细胞出现新的DNA双链，其中一股单链是从亲代完整地接受过来的，另一股单链是完全重新合成，且与母链按碱基配对原则互补。也就是说，两个子代细胞的DNA双链，都和母细胞DNA碱基序列完全一致。1/28/2023分子生物学原理第4页，共39页。 第一节 参与DNA复制的酶底物：脱氧三磷酸核苷聚合酶：依赖DNA的DNA聚合酶模板：解开成单链的DNA母链引物：一段寡核苷酸其它酶和蛋白质因子:起解链、理顺双螺旋、稳定单链的作用。连接酶。1/28/2023分子生物学原理第5页，共39页。 一、DNA聚合酶大肠杆菌中有DNA聚合酶I，II和III。Pol III被认为是原核生物细胞内真正起复制作用的酶。Pol I可以被蛋白酶分成大小片段，大片段有DNA聚合酶的活性，称为Klenow片段。真核生物中发现的DNA聚合酶有?、?、?和?。1/28/2023分子生物学原理第6页，共39页。 DNA聚合酶催化的反应5’到3’的聚合活性(dNMP)n+dNTP?(dNMP)n+1+Ppi1/28/2023分子生物学原理第7页，共39页。 DNA聚合酶催化的反应5’到3’的聚合活性(dNMP)n+dNTP?(dNMP)n+1+Ppi核酸外切酶活性(从5’或3’末端把核苷酸从核酸链上水解下来)1/28/2023分子生物学原理第8页，共39页。 DNA聚合酶的性质以脱氧核苷酸三磷酸(dNTP)为前体催化合成DNA需要模板和引物不能起始合成新的DNA链催化dNTP加到生长中的DNA的3’-OH末端催化DNA合成的方向是5’到3’。1/28/2023分子生物学原理第9页，共39页。 复制的保真性DNA复制保真性至少依赖三种规律：1.遵守严格的碱基配对规律。2.聚合酶在复制延长中对碱基的选择功能。3.复制中出错时有即时的校读功能。1/28/2023分子生物学原理第10页，共39页。 解旋、解链酶复制应先解开DNA的超螺旋、双螺旋结构。解旋、解链酶类：解链酶、DNA拓扑异构酶、单链DNA结合蛋白。1/28/2023分子生物学原理第11页，共39页。 解链酶解链酶是rep，它在ATP存在时解开DNA双链，每解开1对碱基，需要消耗2个ATP。另一种为解旋酶II。在解链过程中，已解开的DNA双链之一，其解链方向与复制方向一致，称为领头链；另一链复制方向与解链方向相反，称为随从链。1/28/2023分子生物学原理第12页，共39页。 DNA拓扑异构酶拓扑酶对DNA分子的作用都是既能水解，又能连接磷酸二酯键。拓扑酶I：不需要ATP，切断DNA双链中的一股，使DNA解链旋转中不打结，适当的时候又把切口封闭，使DNA变成松驰状态。拓扑酶II在无ATP时，切断处于超螺旋的DNA分子，使超螺旋松驰。在有ATP时，松驰状态的DNA进入负超螺旋状态，断口在同一酶催化下再连接起来。1/28/2023分子生物学原理第13页，共39页。 单链DNA结合蛋白单链结合蛋白(SSB)的作用是在复制中维持模板处于单链状态并保护这种单链的完整性。1/28/2023分子生物学原理第14页，共39页。 引物酶和引发体复制是在一段RNA引物的基础上加进脱氧核苷酸的，催化引物合成的是一种RNA聚合酶，它不同于催化转录过程的RNA聚合酶，因此称为引物酶。引物酶在模板的复制起始部位催化互补碱基的聚合，形成短片段RNA。在解链酶结合其它复制因子而可辨认起始点时，就可再结合引物酶，形成引发体。1/28/2023分子生物学原理第15页，共39页。 DNA连接酶DNA连接酶连接DNA链3’-OH末端和另一DNA链的5’-P末端，使二者生成磷酸二酯键，从而把两段相邻的DNA链连成完整的链。连接酶的催化作用在原核细胞需要消耗NAD＋，在真核细胞则消耗ATP。连接酶连接的都是碱基互补基础上的双链中的单链缺口，它并没有连接单独存在的DNA单链或RNA单链的作用。1/28/2023分子生物学原理第16页，共39页。 三种酶催化生成磷酸二酯键的比较1/28/2023分子生物学原理第17页，共39页。 1/28/2023分子生物学原理第18页，共39页。 第二节 DNA复制过程复制的起始复制的延长复制的终止1/28/2023分子生物学原理第19页，共39页。 复制的起始原核生物总是从一个固定的起始点开始，同时向两个方向进行的，称为双向复制。真核细胞染色体比较复杂，可能有多个复制起始点，同时形