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实验六细菌荚膜染色法会计学第1页/共19页实验的目的要求学习并掌握荚膜染色法第2页/共19页荚膜染色的基本原理荚膜是包围在细菌细胞外的一层粘液状或胶质状物质，含水量高，其成分为多糖、糖蛋白或多肽。由于荚膜与染料的亲和力弱、不易着色，而且可溶于水，易在用水冲洗时被洗去。所以通常用衬托法染色(负染色法),使菌体和背景着色，而荚膜不着色，在菌体周围形成一透明圈。也可采用Anthony氏染色法，用结晶紫使细胞和荚膜都着色，再用硫酸铜水溶液洗。荚膜被脱色，但硫酸铜吸附在荚膜上呈现淡蓝色，与深紫色的菌体区分。第3页/共19页实验材料菌种褐球固氮菌、胶质芽孢杆菌试剂绘图墨水1%甲基紫水溶液6%葡萄糖水溶液20%硫酸铜水溶液甲醇香柏油二甲苯仪器和用具载玻片盖玻片滤纸显微镜镜头纸第4页/共19页方法湿墨水法干墨水法(P78)Anthony氏法(P79)第5页/共19页湿墨水法制备细菌墨水混合液加盖玻片镜检第6页/共19页制备细菌墨水混合液2、制备混合液1、滴绘图墨水 挑取少量菌苔绘图墨水与墨水混合均匀涂布滴1滴绘图墨水在载玻片中央第7页/共19页加盖玻片1、加盖玻片2、吸去多余液体在盖玻片上放一张滤纸，轻轻按压吸干多余混合液将盖玻片一端浸泡在细菌墨水混合液中缓缓盖上盖玻片勿留气泡第8页/共19页镜检1、镜检制片置显微镜载物台上2、结果： 背景灰色，菌体较暗，菌体周围荚膜呈现明亮透明圈。用低倍镜高倍镜观察第9页/共19页干墨水法制备细菌墨水混合液涂片固定染色镜检第10页/共19页制备细菌墨水混合液1、滴生理盐水 2、涂片6%葡萄糖挑取少量菌苔在载玻片一端 滴一滴6%葡萄糖水再加一环墨水,混合均匀第11页/共19页涂片4、干燥1、先将推片一端放在混合液上 2、将推片向另一端平行滑动 3、使混合液均匀铺成薄层 室温自然晾干第12页/共19页固定、干燥甲醇固定，自然干燥 甲醇倾去甲醇，室温自然干燥滴甲醇浸没涂片1分钟注意：固定及干燥均不能加热和用热风吹干，因为荚膜含水量高，加热会使其失水变形。同时，菌体失水收缩，会与周围染料脱离产生透明区，导致不产荚膜的细菌被误认为有荚膜。染色第13页/共19页1、滴甲基紫染液2、水洗不要直接冲菌膜甲基紫染液甲基紫染液染色1-2分钟3、自然干燥第14页/共19页镜检1、镜检制片置显微镜载物台上2、结果： 背景灰色，菌体紫色，菌体周围荚膜呈现明亮透明圈。用低倍镜高倍镜观察第15页/共19页Anthony氏法制片固定染色镜检第16页/共19页制片、固定1、滴生理盐水 2、涂片3、干燥固定挑取少量菌苔室温自然晾干生理盐水 与生理盐水混匀均匀涂布滴半滴生理盐水在载玻片中央 染色第17页/共19页1、滴孔结晶紫染液3、脱色1%结晶紫染液20%CuSO4水溶液滴结晶紫染色2分钟镜检第18页/共19页1、镜检制片置显微镜载物台上2、结果： 背景灰色，菌体深紫色，菌体周围荚膜淡紫色。用低倍镜高倍镜观察
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