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实验七厌氧性细菌anaerobicbacteria会计学第1页/共10页第2页/共10页形 态破伤风梭菌(C.tetani)革兰染色涂片：菌体细长，芽胞正圆，比菌体粗，位于菌体顶端，使细菌呈鼓槌状。破伤风梭菌电镜图第3页/共10页产气荚膜梭菌荚膜(体内易形成)：产气荚膜梭菌(C.perfringens)革兰染色涂片：菌体粗大，两端几乎平切。芽胞呈椭圆形，位于次极端，不大于菌体，体外很少形成芽胞。第4页/共10页培 养 特 性血平板庖肉培养基紫牛奶培养基破伤风梭菌37℃ 48h，薄膜状爬行生长物，边缘不齐，伴轻度β 溶血肉汤混浊，肉渣部分被消化，呈灰白色无明显改变产气荚膜梭菌菌落平整，光滑，边缘齐。有双层溶血环：内层完全溶血(θ 毒素引起)，外层不完全溶血(α 毒素引起)分解肉渣中糖类而产生大量气体。分解乳糖产酸，指示剂变黄，培养基凝固,产生大量气体,呈蜂窝状,将液面凡士林上推,甚至冲走管口棉筛。第5页/共10页汹涌发酵：stormy fermentationClostridium perfringens shows stormy fermentation of litmus milk. Acid turns the pH indicator litmus from blue to pink, acid and enzymes coagulate the proteins in the milk, and gas tears the curds apart. 第6页/共10页Nagler 反应产气荚膜梭菌产生卵磷脂酶(α毒素)，在蛋黄琼脂平板上，卵磷脂酶分解蛋黄中的卵磷脂，生成的甘油二酯在菌落周围形成乳白色混浊圈。当加入相应抗毒素后，卵磷脂酶活性丧失，菌落周围不出现混浊圈。第7页/共10页产气荚膜梭菌致病性试验37℃5-8h培养液注入小鼠腹腔→ 断颈处死→剖腹→肝脏印片→石炭酸复红负染染色涂片→自然干燥 →染液 →迅速水洗 →印干 →油镜检第8页/共10页厌氧培养方法1.物理法：厌氧箱或厌氧缸。用物理方法将氧气吸走，充入氮气、二氧化碳、氢气。2.化学法：氢气+氧气 水3生物法：厌氧菌与需氧菌一起放入密闭空间培养。钯双糖管等肠道致病菌粪便标本的分离与鉴定（续）血清学反应第9页/共10页标本已知Ab检测未知Ag (玻片凝集试验)选择鉴别培养基 (SS平板)血清学鉴定37℃生化反应24h